[發(fā)明專利]一種諾如病毒實時等溫擴增檢測試劑盒及其引物和探針

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210360341.0
• 申請日: 2012-09-25
• 公開（公告）號: CN102965452A
• 公開（公告）日: 2013-03-13
• 發(fā)明（設計）人: 莫秋華;馮子力;李衛(wèi)崗;楊澤;林繼燦;劉志明;杜堅
• 申請（專利權）人: 珠海國際旅行衛(wèi)生保健中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 廣州市紅荔專利代理有限公司 44214
• 代理人: 王賢義

1.一種諾如病毒檢測用引物，其特征在于，包括正向引物F1和反向引物R1，所述正向引物F1和所述反向引物R1的堿基序列表示如下：

正向引物F1：5’-TGGAAYTCCATYGCCCACTG-3’；

反向引物R1：

5’-AATTCTAATACGACTCACTATAGGGGTRCTNACAATYTCATCATCACC-3’。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種諾如病毒檢測用引物，其特征在于：所述反向引物R1的5’端的25個堿基是增加的T7噬菌體啟動子序列，而3’端23個堿基是與諾如病毒ORFs1互補的特異性序列，所述正向引物F1和所述反向引物R1的3’端的病毒核酸變異位點使用簡并堿基。

3.一條諾如病毒檢測用分子信標探針，其特征在于，所述分子信標探針的堿基序列表示如下：

分子信標探針P1：

5’-ROX-CCGAGCTGTGCVCTBTCYGARRTBACGCTCGG-DABCYL-3’，

所述分子信標探針P1在其寡核苷酸DNA分子的5’端標記熒光報告基團ROX，3’端標記熒光淬滅基團DABCYL。

4.根據(jù)權利要求3所述的一條諾如病毒檢測用分子信標探針，其特征在于：所述分子信標探針P1的5’端和3’端的6個堿基是形成探針特征性發(fā)夾結構莖端區(qū)的反向互補序列，探針分子中間的20個堿基是與諾如病毒ORFs1反義鏈互補的特異性序列，其中病毒核酸變異位點使用簡并堿基。

5.一種諾如病毒實時等溫擴增檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒至少包括2×實時NASBA反應液和5×酶混合液，所述2×實時NASBA反應液包含有如權利要求1所述的正向引物F1和反向引物R1以及如權利要求3所述的分子信標探針P1。

6.根據(jù)權利要求5所述的一種諾如病毒實時等溫擴增檢測試劑盒，其特征在于，所述2×實時NASBA反應液包括如下組分：

7.根據(jù)權利要求5所述的一種諾如病毒實時等溫擴增檢測試劑盒，其特征在于，所述5×酶混合液包括如下組分：??

8.根據(jù)權利要求5所述的一種諾如病毒實時等溫擴增檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括陽性對照、陰性對照和空白對照。

9.根據(jù)權利要求8所述的一種諾如病毒實時等溫擴增檢測試劑盒，其特征在于：所述陽性對照為諾如病毒體外轉錄的ORFs1基因片段。

10.根據(jù)權利要求8所述的一種諾如病毒實時等溫擴增檢測試劑盒，其特征在于：所述陰性對照為在核酸提取時與標本同時平行提取無菌生理鹽水，所述空白對照為無核酸酶的超純水。