[發(fā)明專利]一種γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶固定化酶及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210359854.X
• 申請(qǐng)日: 2012-09-25
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102851272A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姚忠;田思思;周治;王浩綺;熊強(qiáng);仲兆祥;徐虹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N11/00
• 分類號(hào): C12N11/00;C12P21/02
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 肖明芳

1.一種γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶固定化酶，其特征在于，它包括酶、固定所述酶的載體和包覆材料，所述的酶為γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶，所述的載體為鎳親和載體，所述的包覆材料為聚乙烯亞胺。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶固定化酶，其特征在于，所述的鎳親和載體為Ni?Sepharose?6?Fast?Flow。

3.權(quán)利要求1所述的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶固定化酶的制備方法，其特征在于，將鎳親和載體，加入含有重組γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的細(xì)胞破碎液中，于4～45℃下振蕩反應(yīng)1～6h后，將液體濾出；固體顆粒用pH7.0～9.0的含有200mmol/L咪唑的30～60mmol/L?Tris-HCl緩沖液反復(fù)清洗2～3次，將液體濾出；固體顆粒再用pH7.0～9.0的30～60mmol/L?Tris-HCl緩沖液反復(fù)清洗2～3次，將液體濾出；固體顆粒再用pH7.0～9.0的0.2～1%(v/v)的聚乙烯亞胺水溶液，于4～45℃震蕩反應(yīng)12～24h后，固體顆粒再用pH7.0～9.0的30～60mmol/LTris-HCl緩沖液反復(fù)清洗2～3次，將液體濾出，即制得γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶固定化酶。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶固定化酶的制備方法，其特征在于，將鎳親和載體，加入含有重組γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的細(xì)胞破碎液中，于4℃下振蕩反應(yīng)1h后，將液體濾出，固體顆粒用pH8.0的含有200mmol/L咪唑的50mmol/L?Tris-HCl緩沖液反復(fù)清洗2～3次，將液體濾出；固體顆粒再用pH8.0的50mmol/L?Tris-HCl緩沖液反復(fù)清洗2～3次，將液體濾出；固體顆粒再用pH7.0的0.2%(v/v)的聚乙烯亞胺水溶液，于4℃震蕩反應(yīng)12h后，固體顆粒再用pH8.0的50mmol/L?Tris-HCl緩沖液反復(fù)清洗2～3次，將液體濾出，即制得γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶固定化酶。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶固定化酶的制備方法，其特征在于，對(duì)每g濕質(zhì)量的鎳親和載體，含有重組γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的細(xì)胞破碎液加入體積為10～30mL。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶固定化酶的制備方法，其特征在于，對(duì)于每g濕質(zhì)量的鎳親和載體，重組γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶的細(xì)胞破碎液溶液的加入體積為10mL。

7.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶固定化酶的制備方法，其特征在于，對(duì)每g濕質(zhì)量的鎳親和載體，加入pH7.0的0.2%(v/v)的聚乙烯亞胺水溶液體積為10～30mL。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶固定化酶的制備方法，其特征在于對(duì)于，每g濕質(zhì)量的鎳親和載體，加入pH7.0的0.2%(v/v)的聚乙烯亞胺水溶液體積為10mL。

9.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶固定化酶的制備方法，其特征在于，制備得到的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶固定化酶在pH7.0～9.0的30～60mmol/L?Tris-HCl緩沖液中保存。

10.權(quán)利要求1所述的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶固定化酶在催化制備γ-谷氨酰基化合物中的應(yīng)用。