[發(fā)明專利]蘇木素染色液以及含蘇木素染色液的巴氏染色試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210359280.6
• 申請日: 2012-09-24
• 公開（公告）號: CN102876081A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周華深
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州鴻琪光學(xué)儀器科技有限公司
• 主分類號: C09B67/10
• 分類號: C09B67/10;G01N1/30
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 馮瓊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及體外診斷領(lǐng)域，特別涉及一種蘇木素染色液、含蘇木素染色液的巴氏染色試劑盒及其染色方法。

背景技術(shù)

染色是利用染料在組織切片上給與顏色，使染料中的染色劑與組織或細(xì)胞內(nèi)的某種成分發(fā)生作用，經(jīng)過透明后通過光譜吸收和折射，使其各種微細(xì)結(jié)構(gòu)能顯現(xiàn)不同顏色，這樣在顯微鏡下就可顯示出組織或細(xì)胞結(jié)構(gòu)的技術(shù)。巴氏染色法是液基薄層細(xì)胞學(xué)制片中最好的最常用的染色方法。該染色法不但具有顯示細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，分色明顯，透明度好，胞漿顏色鮮艷等特點(diǎn)，而且所染標(biāo)本不易脫色，可長久保存。

使用蘇木素染色液進(jìn)行核染色是巴氏染色法中比較關(guān)鍵的一步，在使用傳統(tǒng)蘇木素染色液進(jìn)行核染色時(shí)，一般有兩種方法：

一是過染法，首先有意識地進(jìn)行深染，需要通過鹽酸分化過程使核染色趨于合適，染色過程復(fù)雜；二是淡染法，在核染色過程中，需要嚴(yán)格掌握染色時(shí)間，使核染色適宜而不用鹽酸分化。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題為提供一種無需嚴(yán)格控制染色時(shí)間也不會過染的蘇木素染色液，含蘇木素染色液的巴氏染色試劑盒及其染色方法。

具體地，本發(fā)明提供了一種蘇木素染色液，其組分及重量百分比為：

蘇木精0.05%-1%

醇10%-50%

硫酸鋁0.5%-5%

氧化劑0.01%-0.1%

弱酸0.5%-10%

其余為水。

上述蘇木素染色液中，所述醇為甲醇、乙醇、異丙醇或丙三醇中的任意一種或幾種。

優(yōu)選地，所述醇至少包括丙三醇；丙三醇的加入有利于提高蘇木素染色液的穩(wěn)定性，保證染色效果。

所述氧化劑為氧化汞或碘酸鈉。

所述弱酸為乙酸、碳酸、檸檬酸或磷酸中的任意一種。

上述蘇木素染色液中，硫酸鋁的加入加強(qiáng)了蘇木素染色液的著色能力，可縮短蘇木素染色液染細(xì)胞核的時(shí)間。

本發(fā)明蘇木素染色液通過調(diào)整蘇木精、醇以及氧化劑的濃度，使得染色液中氧化后的蘇木精濃度接近著色后細(xì)胞內(nèi)的蘇木精濃度，從而使得細(xì)胞核不會發(fā)生過染。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種巴氏染色試劑盒，包括上述蘇木素染色液。

優(yōu)選地，上述巴氏染色試劑盒還包括EA/OG染色液、返藍(lán)試劑和脫水劑。

所述EA/OG染色液由以下重量百分比的成分組成：

伊紅Y?0.02%-2%

亮綠0.01%-1%

磷鎢酸0.05%-5%

醇10%-95%

碳酸鋰0.01%-1%

其余為水。

上述EA/OG染色液中，所述醇為甲醇、乙醇或異丙醇中的任意一種或幾種。

上述EA/OG染色液中，磷鎢酸和碳酸鋰可組成緩沖對，一方面可中和分色及藍(lán)化時(shí)可能留下的酸或堿，保證染色達(dá)到理想效果；另一方面，對外來酸堿有一定的緩沖作用，防止外來酸堿對染色效果的影響，提高染色的穩(wěn)定性。

上述巴氏染色試劑盒中，所述返藍(lán)試劑為磷酸-磷酸鹽緩沖液、Bis-Tris緩沖液或Tris-HCl緩沖液中的任意一種或幾種，所述緩沖液呈堿性，可以加快細(xì)胞核返藍(lán)速度，縮短細(xì)胞核返藍(lán)時(shí)間，并由于是緩沖液，而避免了傳統(tǒng)氨水作為返藍(lán)試劑時(shí)容易出現(xiàn)返藍(lán)過度的問題。

上述巴氏染色試劑盒中，所述脫水劑為甲醇、乙醇或異丙醇中的任意一種或幾種。

本發(fā)明還提供了一種上述巴氏染色試劑盒的快速染色方法，在常溫下按以下步驟進(jìn)行操作：

（1）采用液基細(xì)胞自然沉降法制備細(xì)胞抹片，待細(xì)胞完全沉降后加脫水劑處理；

（2）使用返藍(lán)試劑進(jìn)行水化；

（3）使用蘇木素染色液進(jìn)行核染色，后用返藍(lán)試劑進(jìn)行返藍(lán)，并用脫水劑進(jìn)行脫水處理；

（4）使用EA/OG染色液進(jìn)行胞漿染色，使用脫水劑進(jìn)行清洗；

（5）二甲苯透明，封片。

本發(fā)明蘇木素染色液具有以下優(yōu)點(diǎn):

（1）無需嚴(yán)格控制時(shí)間也不會發(fā)生過染，與傳統(tǒng)的過染法相比，省了鹽酸分化除去核過染染料的步驟；

（2）含硫酸鋁，加強(qiáng)了蘇木素染色液的著色能力；

含本發(fā)明蘇木素染色液的巴氏染色試劑盒除具有以上優(yōu)點(diǎn)外，還具有以下優(yōu)勢：

（1）采用堿性緩沖液作為返藍(lán)試劑，其返藍(lán)速度快，效果好；

（2）EA/OG染色液中含有鏻鎢酸和碳酸鋰，對外來酸堿有一定的緩沖作用，防止外來酸堿對染色效果的影響，提高染色穩(wěn)定性；