[發明專利]一種海洋過氧化氫酶產酶菌及其定向篩選方法

有效

• 申請號: 201210358267.9
• 申請日: 2012-09-24
• 公開（公告）號: CN102864106A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發明（設計）人: 吳月紅;許學偉;王春生;吳敏;張心齊;潘杰
• 申請（專利權）人: 國家海洋局第二海洋研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/08;C12Q1/30;C12Q1/04;C12R1/01
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 徐飛虎;徐關壽

1.一種過氧化氫酶產酶菌，分類命名為中華動性桿菌(Planomicrobium?chinense），保藏編號為CGMCC?No.6043。

2.根據權利要求1所述的過氧化氫酶產酶菌，其特征在于：所述菌株具有以下特征：

（1）菌落形態：菌落呈圓形，表面光滑，邊緣平整，微凸起，黃色；

（2）細胞形態：革蘭氏陽性菌，細胞顯微鏡下呈現運動性，形態為球狀居多（0.8×1.0μm）；

（3）生理生化特征：好氧生長；水解明膠，不水解淀粉、酪素、吐溫80和七葉樹素；能利用葡萄糖產酸，不能利用蔗糖、棉子糖、木聚糖、乳糖、阿拉伯糖、纖維二糖、木糖、鼠李糖、密二糖、甘露糖或甘露醇產酸。

3.根據權利要求1所述的過氧化氫酶產酶菌，其特征在于：所述菌株的16S?rRNA基因包含如Seq?ID?No.1所示的核苷酸序列。

4.一種利用權利要求1所述的菌株生產過氧化氫酶的方法，包括以下步驟：

（1）將CGMCC?No.6043菌株接種至天然海水液體培養基，培養后加入過氧化氫進行刺激培養作為種子液；

（2）將種子液轉接至發酵培養基中進行發酵培養，然后加入過氧化氫刺激培養，即可得到具有過氧化氫酶活力的發酵液。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法步驟（1）中的天然海水培養基的配方包括0.1-0.5%蛋白胨，0.1-0.5%Casamino?acid，0.005-0.05%酵母提取物，其余為天然海水，調節pH為6.8-7.5。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述方法步驟（2）中的發酵培養基配方包括1-10g/L酵母抽提物，0.5-5g/L蛋白胨，其余為天然海水，pH為6.5-8.0。

7.根據權利要求4-6任一項所述的方法，其特征在于：根據需要，可任選對具有酶活力的發酵液進行處理，從中分離純化出過氧化氫酶的產物。

8.一種定向篩選過氧化氫酶高產菌株的方法，包括如下步驟：

（1）、將海水樣品在無菌條件下加入半固體培養基中，并加入預先過濾除菌的碳和氮源，震搖富集培養；

（2）、對富集培養液進行無菌稀釋涂布，挑選單克隆進行斜面保存；

（3）、將分離獲得的菌株轉接至天然海水液體培養基進行搖瓶發酵，采用分光光度法進行過氧化氫酶活性復篩，最終篩選出過氧化氫酶活相對較高的菌株。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于：所述方法步驟（1）中半固體培養基通過如下方法制備：將天然海水采用NaOH或HCl微調pH至6.8-7.5，加入質量百分數為0.5-1%的瓊脂濕熱滅菌，待溫度降低至40-60℃左右在無菌條件下加入過濾除菌的0.5-10mM過氧化氫，混勻后冷卻凝固制成半固體培養基。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于：所述方法步驟（3）中，天然海水液體培養基包括0.1-0.5%蛋白胨，0.1-0.5%Casamino?acid，0.005-0.05%酵母提取物，其余為天然海水，調節pH為6.8-7.5。