[發明專利]聚合半抗原成為免疫原的方法

有效

• 申請號: 201210355280.9
• 申請日: 2012-09-21
• 公開（公告）號: CN103665286B
• 公開（公告）日: 2017-03-01
• 發明（設計）人: 林哲雄;王玉麒
• 申請（專利權）人: 王玉麒
• 主分類號: C08G12/32
• 分類號: C08G12/32
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司11021
• 代理人: 周長興

技術領域

本發明是關于一種將半抗原直接聚合形成免疫原的方法，尤其指一種將半抗原聚合成分子量為4000Da以上的大分子，以形成免疫原的方法。

背景技術

免疫分析技術因其靈敏度高、專一性佳、省時、成本效益良好、以及操作方便等優點，故常被應用于醫學檢驗、食品檢測及環境檢測等用途。在該技術中，可專一辨識標的物的抗體為核心成分，能否生產該抗體分子即為成功發展免疫分析技術的首要步驟。然而，許多檢測標的物的分子量過小，無法直接激發動物體內產生抗體的免疫反應，故不具免疫原性(immunogenecity)，而被稱為半抗原(hapten)。為了使動物體內產生能夠辨識半抗原的抗體，目前學界及業界多藉由學方法將半抗原與載體蛋白分子(carrier?protein)進行連結，形成半抗原-載體蛋白復合物(hapten-carrier?protein?complex)，期盼通過載體蛋白的免疫原性，并聯激活動物的免疫系統以產生辨識半抗原的抗體。然而此一策略仍有諸多限制，包括需選擇特定的載體蛋白、需考慮半抗原與載體蛋白的鍵結方式及鍵結距離等因素，故不盡然能成功產生標的抗體；或者，即便動物已被并聯激活能表現可辨識半抗原的抗體，但該抗體也僅占動物所生成抗體的些許部分，因而標的抗體的生成效率欠佳，也造成后續抗體分離與純化的困難，進而升高標的抗體的生產成本。

以三聚氰胺(melamine)為例，由于其分子量僅有126Da，并無法直接用來免疫注射動物以產生對應抗體；因而現行生產三聚氰胺抗體的研究，都是先將三聚氰胺進行化學修飾以增添額外的官能基，再將的與特定的載體蛋白進行連結，以作為免疫注射的免疫原。此一產生免疫原的步驟不僅過程繁瑣、耗時冗長、且需有專業訓練的操作人員，因此不能被輕易達成或推廣普及；此外，以此種免疫原所誘導產生的抗體，也多數是辨識載體蛋白，若有并聯誘發成功的話，則僅有少許抗體會針對修飾過的三聚氰胺，因此標的抗體的生產效能上仍有很大的改進空間。

發明內容

為了使動物能針對標的半抗原產生專一性的抗體，本發明將不具免疫原性的半抗原直接聚合形成大分子的免疫原，如此不僅簡化將半抗原轉化為免疫原的步驟，更可因免除載體蛋白的參與而顯著提升生產標的抗體的效能。

本發明的目的在于提供一種將半抗原直接聚合形成免疫原的方法，其步驟包括：

A)提供含半抗原的反應溶液，其中半抗原為含有兩個或兩個以上胺基的化學物質、含有兩個或兩個以上羧基的化學物質、或含有一個或一個以上胺基以及含有一個或一個以上羧基的化學物質；

B)加入交聯劑至含半抗原的反應溶液；以及

C)進行聚合反應得到免疫原。

步驟C中，當半抗原為該含有兩個或兩個以上胺基的化學物質時，交聯劑包含二醛類、多醛類、雙羧酸類或多羧酸類；當半抗原為該含有兩個或兩個以上羧基的化學物質時，交聯劑包含二醇類、多醇類、雙胺類或多胺類；當半抗原為該含有一個或一個以上胺基以及含有一個或一個以上羧基的化學物質時，交聯劑包含1-ethyl-3-(3-dimethyl?aminopropyl)-carbodiimide(EDC)，或彼此以羧基胺基脫水聯結。

此外，步驟A中，該含半抗原的反應溶液的濃度為1×10^-10mM以上，其中又以1×10^-10mM至半抗原可溶解的最大飽和濃度為較佳。

而步驟B中，該交聯劑的濃度為1×10^-10mM以上，其中又以1×10^-10mM至交聯劑的最大濃度為較佳，又以125mM至300mM為更佳。

反應溫度對于半抗原的聚合反應有顯著的影響，步驟C中的聚合反應溫度是半抗原可承受的溫度范圍，較佳為37℃至80℃的溫度條件。

本發明中一較佳實施例，是將不具免疫原性的三聚氰胺半抗原直接聚合成為免疫原，并用以注射于動物體內，使動物產生標的抗體的技術方法。三聚氰胺具有三個胺基，利用交聯劑戊二醛進行連結反應，可將小分子的三聚氰胺聚合成為大分子的聚合物，該聚合反應如下式所示。

三聚氰胺(M)????戊二醛??????三聚氰胺(M)

三聚氰胺二聚體(M-M)?????三聚氰胺聚合物(M-M)n