[發(fā)明專利]毒蠟樣芽胞桿菌快檢試劑

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210354584.3
• 申請(qǐng)日: 2012-09-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103667416A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔瑛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島道合生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/04
• 分類號(hào): C12Q1/04;C12R1/085
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域????本發(fā)明涉及一種毒蠟樣芽胞桿菌快檢試劑，特別是最常見(jiàn)的在外環(huán)境中生活力較強(qiáng)，在水、牛乳及肉類食品中能生存幾個(gè)月，最適溫度下繁殖迅速的毒蠟樣芽胞桿菌的快檢試劑。毒蠟樣芽胞桿菌食物中毒多由米飯、動(dòng)物性食品，特別是肉類引起（如病死牲畜肉、熟肉制品），也可由家禽、蛋類、奶類食品引起。以急性胃腸炎為主，主要癥狀有嘔吐，腹瀉，腹痛，糞便為黃綠色水樣便。發(fā)熱３８℃－４０℃。重病人出現(xiàn)寒戰(zhàn)，驚厥，抽搐和昏迷。老人，兒童和體弱者如不及時(shí)進(jìn)行急救處理也可導(dǎo)致死亡。傳統(tǒng)常規(guī)檢測(cè)診斷方法為細(xì)菌培養(yǎng)分離，選擇標(biāo)準(zhǔn)典型菌株再進(jìn)行血清學(xué)鑒定檢測(cè)。整個(gè)檢測(cè)確診過(guò)程耗時(shí)長(zhǎng)、一般需要72-120小時(shí)，靈敏度不高，對(duì)快速準(zhǔn)確診斷，搶救病人帶來(lái)極大的不便，本發(fā)明打破傳統(tǒng)常規(guī)分步檢測(cè)手段，在快速鑒別診斷食物中毒致病菌毒蠟樣芽胞桿菌的應(yīng)用上具有明顯的優(yōu)勢(shì)。從而減少由于檢測(cè)手段落后而造成對(duì)人體健康的危害，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高等特點(diǎn)。較傳統(tǒng)方法更具有應(yīng)用價(jià)值，對(duì)指導(dǎo)臨床診斷和治療，防止濫用抗菌藥物具有重要意義。

背景技術(shù)????本發(fā)明的目的在于提供一種毒蠟樣芽胞桿菌快檢試劑,蠟樣芽胞桿菌引起食物中毒。全年都可發(fā)生，多由米飯、動(dòng)物性食品如肉類引起引起。傳統(tǒng)常規(guī)檢測(cè)診斷方法是要經(jīng)過(guò)標(biāo)本采集、分離鑒定、小白鼠喂飼實(shí)驗(yàn)、雙份血清凝集實(shí)驗(yàn)、沉淀實(shí)驗(yàn)等鑒定實(shí)驗(yàn)才能確診。傳統(tǒng)生化鑒定試驗(yàn)周期長(zhǎng)，操作繁瑣，試劑質(zhì)量無(wú)法保證，嚴(yán)重影響了致病菌確認(rèn)工作、選擇性分離培養(yǎng)的培養(yǎng)基上挑選可疑菌落需要經(jīng)驗(yàn)，存在漏檢的可能，而毒蠟樣芽胞桿菌的腸毒素穩(wěn)定性很高，加工后的食物雖然有時(shí)檢不出，但仍有可能存在腸毒素，而腸毒素的常規(guī)檢驗(yàn)方法需要做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，難度大，周期長(zhǎng)。整個(gè)檢測(cè)確診過(guò)程耗時(shí)長(zhǎng)約4-15天。本發(fā)明是將增菌液中增加了特異性的毒蠟樣芽胞桿菌多價(jià)及單價(jià)血清，使檢測(cè)確診過(guò)程縮短至2-6小時(shí)，增菌時(shí)能夠利用特異血清的血清凝集反應(yīng)，鑒定的準(zhǔn)確率均在97％以上。檢測(cè)致病菌時(shí)耗時(shí)少、靈敏度高，準(zhǔn)確性強(qiáng)。

發(fā)明內(nèi)容????本發(fā)明的要點(diǎn)在于選擇合適的培養(yǎng)基組分，并進(jìn)行合理混配，經(jīng)加溫、溶解、混合、冷卻、分裝、高溫滅菌、無(wú)菌制備血清等工藝而成一種毒蠟樣芽胞桿菌快檢試劑。

本發(fā)明選擇的快檢試劑配方如下（克/每升蒸餾水）蛋白胨?5.0-10.0；乳糖?3.5-4.5；磷酸氫二鈉?4.0-5.0；磷酸二氫鈉5.0-6.0；復(fù)合生長(zhǎng)因子10.0-20.0；無(wú)菌毒蠟樣芽胞桿菌多價(jià)及單價(jià)血清?10-20ml；蒸餾水加至1000?mL，調(diào)pH7.1

快檢試劑呈無(wú)色或淡黃色透明液體，無(wú)任何沉淀物。食物源性中毒樣品在接種培養(yǎng)2-6小時(shí)時(shí)，液面交界有處有白色沉淀凝集，鏡下有凝集包團(tuán)，為陽(yáng)性，即可確診。磷酸鹽為緩沖劑，保持培養(yǎng)基pH穩(wěn)定，有利致病菌的生長(zhǎng)繁殖。

本發(fā)明產(chǎn)品的制備方法是：

1)、將蛋白胨、乳糖?、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、復(fù)合生長(zhǎng)因子混合于900?mL蒸餾水加熱溶解，調(diào)pH7.1，121℃15min高壓滅菌；

2)、冷卻后以無(wú)菌操作將兩液合并，加無(wú)菌毒蠟樣芽胞桿菌多價(jià)及單價(jià)血清混勻，分裝于滅菌容器內(nèi)備用。

本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：(1)?快檢試劑營(yíng)養(yǎng)豐富、配制簡(jiǎn)單；(2)?臨床應(yīng)用效果滿意，解決了床邊接種的困難，污染小；?(3)?檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、時(shí)間短、選擇性強(qiáng)、檢出率高；?(4)?接種樣本2-6小時(shí)后，即能得到液體篩選增菌凝集包團(tuán)，便于觀察菌落生長(zhǎng)情況，穩(wěn)定性好；（5）對(duì)快速準(zhǔn)確診斷，搶救病人對(duì)指導(dǎo)臨床診斷和治療，防止濫用抗菌藥物具有重要意義。

具體實(shí)施方式????下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明：

按照下表所列數(shù)據(jù)（克/每升蒸餾水）及其所述步驟進(jìn)行配置：

配方一：

蛋白胨?5.0-10.0；乳糖?3.5-4.5；磷酸氫二鈉?4.0-5.0；磷酸二氫鈉5.0-6.0；復(fù)合生長(zhǎng)因子10.0-20.0；無(wú)菌毒蠟樣芽胞桿菌多價(jià)及單價(jià)血清?10-20ml；蒸餾水加至1000?mL，調(diào)pH7.1。???

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配方二：

蛋白胨?6.0-8.0；乳糖?4.0-4.5；磷酸氫二鈉?4.5-5.0；磷酸二氫鈉5.5-6.0；復(fù)合生長(zhǎng)因子14.0-20.0；無(wú)菌毒蠟樣芽胞桿菌多價(jià)及單價(jià)血清?14-20ml；蒸餾水加至1000?mL，調(diào)pH7.1。??