[發(fā)明專利]桑黃菌株液體發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵產(chǎn)桑黃多糖的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210350971.X
• 申請日: 2012-09-20
• 公開（公告）號: CN102875225A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭金貴;黃緣緣;黃志偉;謝寶貴
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號: C05G3/00
• 分類號: C05G3/00;C12P19/04;C12R1/645
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明具體涉及一種桑黃菌株液體發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵產(chǎn)桑黃多糖的方法。

背景技術(shù)

桑黃（Phellinus?igniarius），中藥名，由于通常生長在桑屬（Morus?L.）植物上且子實(shí)體為黃褐色的緣故而得名，有“森林黃金”之美稱。桑黃是一種大型珍貴的多年生藥用真菌，以子實(shí)體入藥，在我國，應(yīng)用桑黃治病從明朝開始到至今已經(jīng)有2000多年的歷史了。在古代，民間就流傳有“桑樹生黃，幸得之，百病可醫(yī)”的說法及“如果得到附生于桑樹上的黃色疙瘩（桑黃），死人也可復(fù)活”的傳說。中醫(yī)認(rèn)為桑黃性寒、味微苦、味辛，歸肝、膀胱經(jīng)。本品辛行甘和，人血分以化瘀，瘀血循經(jīng)而行出血止，有化瘀之功效，能利五臟、軟堅(jiān)、排毒、止血、活血和胃止瀉等。民間用于治痢疾、盜汗、血崩、血淋、臍腹?jié)础徔叻e聚、癖軟、脫肛瀉血、帶下、經(jīng)閉、脾虛泄瀉等。同時民間把它作為一種治療肝病、癌癥的絕藥。

近幾年來,?隨著現(xiàn)代分析與檢測方法的不斷改進(jìn)及新方法的開發(fā)，對桑黃的研究也進(jìn)入了一個新的階段。其藥用價值也引起了各國科學(xué)家們的關(guān)注。隨著越來越多國家對桑黃的人工栽培、生物學(xué)特性、所含多糖、多糖分子結(jié)構(gòu)及其藥理作用等方面開展的廣泛而深入的研究，而且由于桑黃是目前國際公認(rèn)的生物治癌領(lǐng)域中有效率排在第一位的藥用菌，其在抗腫瘤、提高免疫功能以及治療疾病等方面都有明顯的作用，所以其具有廣闊的市場前景。

但是由于桑黃對生長環(huán)境、溫度、濕度要求極高，加之生長周期長，極難發(fā)現(xiàn)，因而天然的桑黃數(shù)量非常稀少，貨源奇缺，價格昂貴。同時由于外商需求量大，經(jīng)濟(jì)效益高，致使各產(chǎn)地對桑黃進(jìn)行掠奪性開采，野生子實(shí)體孢子無法形成。在我國東北地區(qū)該資源已經(jīng)難以恢復(fù)，西北也即將枯竭。再加上我國天然的桑黃數(shù)量本來就非常稀少，子實(shí)體的人工栽培尚處于起步階段，所以要想形成穩(wěn)定的醫(yī)藥工業(yè)產(chǎn)品來源，就必須充分挖掘桑黃的自然資源，深入開展桑黃菌種的分離培養(yǎng)，以利于分離出生長周期短、抗污染能力強(qiáng)、多糖產(chǎn)量高及其藥理作用好的桑黃菌種。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種桑黃菌株液體發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵產(chǎn)桑黃多糖的方法，能顯著提高桑黃的菌絲體產(chǎn)量和胞內(nèi)、外多糖含量。

首先提供了一種用于桑黃菌株液體發(fā)酵的培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖20-30?g/L，酵母粉2-6?g/L，KH₂PO_4?1-3?g/L，MgSO₄·7H₂O?0.3-0.7?g/L，V_B1?10?mg/L，水1L，pH自然。

更優(yōu)選地，所述培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖25?g/L，酵母粉6?g/L，KH₂PO_4?1?g/L，MgSO₄·7H₂O?0.5?g/L，V_B1?10?mg/L，水1L，pH自然。

利用上述的培養(yǎng)基發(fā)酵產(chǎn)桑黃多糖的方法，其發(fā)酵條件：溫度28-32?℃，搖速140-180?rpm，接種量20%-30?%，培養(yǎng)天數(shù)9-11?d；離心，收集發(fā)酵液，用蒸餾水洗滌沉淀，獲得菌絲體；然后進(jìn)行胞內(nèi)、胞外多糖提取。

所述胞內(nèi)多糖的提取：將烘干后的菌絲體研磨粉碎，過40目篩后，稱取1?g菌絲體粉，加入10-30?ml蒸餾水，80-100℃熱水浸提0.5-3h，抽濾，濃縮至原體積的1/5，然后加3倍體積的無水乙醇，4℃靜置12?h，10000?rpm，4℃離心10?min，收集沉淀，干燥；得到的胞內(nèi)粗多糖溶于水用苯酚硫酸法測多糖含量。

所述胞外多糖的提取：將發(fā)酵液濃縮至原體積的1/5，然后加3倍體積的無水乙醇，4℃靜置12?h，10000?rpm，4℃離心10?min，收集沉淀，干燥；得到的胞外粗多糖溶于水用苯酚硫酸法測多糖含量。

更優(yōu)選地，發(fā)酵條件：溫度28?℃，搖速160?rpm，接種量25?%，培養(yǎng)天數(shù)10?d。

最佳胞內(nèi)多糖提取工藝：料水比w/v=1:30，浸提溫度90?℃，浸提時間0.5?h，浸提次數(shù)3次。

????本發(fā)明用于優(yōu)化的桑黃菌株為裂蹄木層孔菌（Phellinus?linteus）ph.l?0003+1，于2012年7月12日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC），地址:?武漢?武漢大學(xué)，保藏編號CCTCC?M?2012284）。