[發明專利]用于雞蛋溯源的微衛星引物、其試劑盒及應用

無效

• 申請號: 201210350903.3
• 申請日: 2012-09-19
• 公開（公告）號: CN102864225A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發明（設計）人: 楊寧;鄭江霞
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;張慶敏

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，具體涉及用于雞蛋溯源的微衛星引物、其試劑盒及應用。

背景技術

雞蛋因其價格便宜、蛋白質含量高、品質好等特點，是人們日常生活中必不可少的食物之一。尤其是我國這樣的人口大國，雞蛋消費量非常高，但如何保障雞蛋的安全就成了一個棘手的問題，近年來三聚氰胺蛋、假雞蛋等事件更是給雞蛋安全帶來問題，在這種情形下，雞蛋產品的溯源勢在必行。

目前雞蛋的普遍溯源流程由雞場、加工包裝廠和銷售物流3個可追溯環節組成，可追溯信息包括蛋雞孵化信息、蛋雞養殖過程中與安全和品質相關的信息、蛋雞產蛋信息、雞蛋產后粗加工處理控制信息及雞蛋物流銷售信息等。適合雞蛋標識的主要為條形碼技術。在眾多條型碼中，EAN-128碼應用比較廣泛，EAN-128碼是根據EAN/UCC-128碼標準將信息表示為條碼符號，具有唯一性、通用性、完整性、緊密性及高可靠度等特性。由于其字符集大，密度高，所表示的信息可包含生產過程中的一些可變信息，如生產日期、批號等，實現了信息的快速、準確獲取與傳輸。消費者能夠獲知產蛋日期、養殖者、養殖基地、產品等級、檢測指標等屬性，但其信息的可靠性卻無從驗證。微衛星DNA，又被稱作短串連重復或簡單重復序列，每單元長度在1～6bp之間，是首尾相連組成的串聯重復序列。微衛星多態性分析在畜禽遺傳多樣性評估，品種資源的分類、保存和利用方面發揮著重要作用。此外，還可以利用微衛星多態性進行親子鑒定，即以多個微衛星座位在群體中的等位基因的頻率為基礎，計算排除概率得出。目前隨著生物信息學技術的發展和應用使得基于DNA的可追溯成為可能，尤其是畜禽個體本身“遺傳條形碼”的優越性不可改變，是畜禽產品溯源的終極解決方案。

目前，應用微衛星DNA技術對雞蛋進行分子溯源的方法還未有報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于雞蛋溯源的微衛星引物。

本發明另一目的是提供一種含有上述引物的檢測試劑盒。

本發明再一目的是提供一種雞蛋溯源的檢測方法。

本發明又一目的是提供上述微衛星引物或試劑盒在判斷雞蛋或蛋雞遺傳關系中的應用。

本發明提供用于雞蛋溯源的微衛星引物，其包括為Seq?No?ID?1和2、Seq?No?ID?3和4、Seq?No?ID?5和6、Seq?No?ID?7和8、Seq?No?ID?9和10、Seq?No?ID?11和12、Seq?No?ID?13和14、Seq?No?ID?15和16、SeqNo?ID?17和18、Seq?No?ID?19和20所示的核苷酸序列中的一對或幾對。

進一步，本發明還提供含有上述引物的試劑盒。該試劑盒還包括以下試劑中的一種或幾種：PCR緩沖液、Mg²⁺、DNA聚合酶、dNTPs。

本發明利用雞蛋和蛋雞樣品的微衛星多態分析，分析它們的遺傳關系。具體包括以下步驟：

1）分別提取蛋雞DNA和雞蛋DNA；

2）利用上述微衛星引物，分別以步驟1）中的蛋雞DNA和雞蛋DNA為模板進行PCR擴增；

3）將PCR產物進行變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分析，讀取膠圖判定基因型之后，使用Dispan軟件計算奈氏遺傳距離（Ds），判斷其遺傳關系。

其中，所述雞蛋DNA從雞蛋卵黃膜中提取得到，所述蛋雞DNA為從蛋雞血液中提取得到。

所述PCR擴增的反應條件為：95℃預變性5min；95℃變性30s，62-65℃退火30s，72℃延伸30s，30-35個循環；72℃延伸7min。

本發明的有益效果：

1）本發明的檢測方法操作簡單、快捷、費用低廉、準確度高，并可實現自動化的直接檢測。

2）本發明方法開發檢測試劑盒的檢測結果可靠、穩定、準確，為突發雞蛋安全事件的相關責任認定提供判斷依據。

3）本發明從卵黃膜提取基因組DNA，基因組DNA含量達到74.91±24.00ng/μl，將分子生物學方法用于鑒別真假雞蛋，并且實現從雞蛋到蛋雞的生物學追溯，可有效監控市售雞蛋的質量安全。

附圖說明

圖1為四組樣品的因子相關分析圖，A代表來自中國農業大學實驗雞場的白來航未受精雞蛋；B代表中國農業大學實驗雞場的白來航蛋雞血樣；C代表北京某祖代雞場的白來航蛋雞血樣；D代表北京某祖代雞場的洛島紅蛋雞血樣。

具體實施方式