[發明專利]高效表達HA蛋白的重組流感病毒及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201210350735.8
• 申請日: 2011-09-08
• 公開（公告）號: CN102851258A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 李澤君;滕巧泱
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/63;C12N15/44;A61K39/145;A61P31/16
• 代理公司: 上海大邦律師事務所 31252
• 代理人: 周東萍

1.一種PR8重組流感病毒，其特征在于，其含有H4亞型流感病毒的HA和/或NA基因、含有PR8病毒的6個內部基因(PB1，PB2，PA，NP，M，NS基因)，其中NS和NP基因或二者之一含有以下突變位點：NS基因編碼的NS2蛋白上具有E67S點突變、或E74S點突變、或E67S/E74S點突變，NP基因編碼的NP蛋白上具有G132A點突變。

2.一種制備權利要求1所述的PR8重組流感病毒的方法，其特征在于，包括以下步驟：

構建分別包含H4亞型流感病毒的HA和NA基因的重組質粒；

構建包含PR8病毒突變基因片段的重組質粒，該PR8病毒突變基因片段選自下述突變的NS或NP基因片段：編碼含有E67S、或E74S、或NS2E67/74S點突變的NS2蛋白的PR8病毒NS基因片段，編碼含有G132A點突變的NP蛋白的PR8病毒NP基因片段；

將上述H4亞型流感病毒的HA基因的重組質粒和NA基因的重組質粒，與上述包含PR8病毒突變基因片段的重組質粒、以及分別包含PR8病毒PA、PB1、PB2、M、NP或NS內部基因的質粒按相應組合一起轉染293T細胞，培養轉染后的細胞；

將培養的細胞上清接種于雞胚，在孵化器內培養合適時間后，收獲雞胚尿囊液，檢測該尿囊液的血凝性，如果有血凝活性，并且經過序列分析確定沒有非預期突變后，即獲得PR8重組流感病毒。

3.權利要求1所述的PR8重組流感病毒在制備流感疫苗中的應用。

4.一種疫苗，其特征在于，包含權利要求1所述的PR8重組流感病毒。