[發明專利]高效表達HA蛋白的重組流感病毒及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201210350701.9
• 申請日: 2011-09-08
• 公開（公告）號: CN102864127A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發明（設計）人: 李澤君;滕巧泱
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/85;A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93
• 代理公司: 上海大邦律師事務所 31252
• 代理人: 周東萍

本申請是申請日為2011年9月8日，申請號為201110266082.0，發明名稱為“高效表達HA蛋白的重組流感病毒及其制備方法和應用”的發明申請的分案申請。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及到疫苗的生產領域，具體地，是涉及到一種高效表達HA蛋白的重組流感病毒及其制備方法和應用。

技術領域

流感是由正粘病毒科流感病毒屬A型流感病毒引起的一種急性、高度接觸性傳染病，高致病性禽流感被國際動物衛生組織確定為A類疫病。流感病毒根據基質蛋白(Matrix?protein，M)的不同可以分為A、B、C三型。根據流感病毒血凝素(Hemagglutinin，HA)和神經氨酸酶(Neuraminidase，NA)抗原性的差異，又可將流感病毒分為不同的亞型，A型流感病毒根據HA劃分為16個亞型，根據NA劃分為9個亞型。流感病毒具有高度傳染性，可通過飛沫傳播，因此它能在短期內突然發生，迅速蔓延，造成不同程度的流行，甚至世界大流行。1983-1984年，美國賓州的高致病性禽流感暴發，造成1700萬家禽死亡，損失近6500萬美元。2003年年底，亞洲多個國家和地區暴發了高致病性的禽流感。禽流感的暴發，使1億多只家禽死亡或被撲殺，部分國家禽肉產量和銷售量急劇下降，價格下跌，禽肉及其制品進出口暫時中止；此外，家禽養殖業、飼料行業和旅游業也都受到不利的影響。據糧農組織估計，由此遭受的損失至少為5億美元。此外，許多亞型的禽流感病毒具有跨宿主傳播至人的能力，因而，該病的暴發也同時危害著社會公共安全。二十世紀爆發了三次流感的大流行，分別是1918年西班牙流感(H1N1)、1957年亞洲流感(H2N2)和1968年香港流感(H3N2)，其中最大規模的流行為西班牙流感。該流感疫病造成全球2000萬人的死亡，超過第一次世界大戰死亡人數，列全球所有傳染病死亡的第一位。

流感病毒的基因組由單股，負義RNA片段組成.。A型流感病毒分為8個片段，編碼11種功能蛋白，片段1、2、3分別編碼三個聚合酶蛋白PB2、PB1和PA；片段4編碼血凝素HA；片段5編碼核衣殼蛋白NP；片段6編碼神經氨酸酶NA；片段7編碼基質蛋白M1和離子通道M2；片段8編碼非結構蛋白NS1和NS2。其中HA和NA是流感病毒最主要的兩種表面糖蛋白，HA蛋白是流感病毒最重要的保護性抗原。

目前，各國對動物和人流感的預防控制采取了不同的措施，但是疫苗接種仍然是預防流感的最佳選擇，因此研制有效的流感疫苗對于控制流感流行具有極其重要的意義。全病毒滅活疫苗是目前應用最廣泛的疫苗，該疫苗安全性好，不會出現毒力返強和變異的危險，能夠經受同種亞型流感病毒的攻擊。目前已上市的流感疫苗基本都是使用雞胚培養制備，國內外使用雞胚培養疫苗已經有50年歷史。由于雞胚生產流感疫苗需要消耗大量的雞胚，雞胚帶有潛在污染可能，而且培養周期過長，不易于擴大產量，不利于應對大規模的流感爆發。為此，世界衛生組織、美國政府等都鼓勵發展細胞培養技術替代目前的雞胚培養技術來生產流感疫苗。為加快細胞培養流感疫苗技術的開發，美國政府決定投資11億美元資助葛蘭素史克、edImmune、諾華、DynPort、Solvay和巴斯德6個主要的流感疫苗開發新技術。在2007年，全球最大的生物制藥公司之一諾華宣布其人用流感疫苗Optaflu上市，成為唯一獲批(歐盟批準)的人用細胞培養流感疫苗，是50年流感疫苗生產史最重大的創新之一。

無論采用雞胚法和大規模細胞制備法獲得病毒，重要的影響因素便是疫苗種毒本身是不是高產量的病毒株。A/Puerto?Rico/8/34(PR8)是一株雞胚適應病毒株，是目前在雞胚上高產株之一，疫苗研制中常常將PR8的6個內部基因與流行毒株的HA和NA基因重組(6+2模式)，將重組病毒作為疫苗株來提高病毒滴度。為了進一步提高PR8的病毒滴度，滿足在流感大暴發時，巨大的疫苗需求量，科研人員進行了大量的研究，通過優化病毒基因來提高病毒株產量。研究發現該流感病毒一些蛋白的某個氨基酸位點對該病毒的增殖能力具有重要的影響，如PB2上360位的酪氨酸(Tyr)和NS1上55位的谷氨酸(Glu)也起到一定作用。

發明內容

本發明的目的之一，在于提供一種PR8突變重組流感病毒，該重組流感病毒可高效表達HA蛋白，適用于大規模生產流感疫苗。

實現上述目的技術方案如下：