[發明專利]一種西那普肽的化學合成方法

有效

• 申請號: 201210345662.3
• 申請日: 2012-09-18
• 公開（公告）號: CN102850440A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 肖慶;劉建;馬亞平;袁建成
• 申請（專利權）人: 深圳翰宇藥業股份有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/04
• 代理公司: 深圳市深佳知識產權代理事務所(普通合伙) 44285
• 代理人: 唐華明

技術領域

本發明涉及多肽藥物制備方法領域，尤其涉及一種西那普肽的化學合成方法。

背景技術

新生兒呼吸窘迫綜合征（neonatal?respiratory?distress?syndrome，NRDS）指新生兒出生后出現短暫（數分鐘至數小時）的自然呼吸，繼而發生進行性呼吸困難、發紺、呻吟等急性呼吸窘迫癥狀和呼吸衰竭。患兒肺內形成透明膜為其主要病變，故又稱新生兒肺透明膜病（hyaline?membrane?disease?of?newborn）。據悉，我國每年約有1600萬新生兒，新生兒呼吸窘迫綜合征的發病率大約是0.5％。而在美國，每年約有2萬～3萬新生兒患此病，占妊娠數的1％。新生兒呼吸窘迫綜合征發生的原因主要是由于缺乏肺表面活性物質（pulmonarysurfactant，PS），呼氣末肺泡萎陷，致使出生后不久出現進行性加重的呼吸窘迫和呼吸衰竭，常見于早產兒，胎齡越小，發病率越高。

2012年3月6日，美國食品及藥物管理局（FDA）批準了蘆西納坦（lucinactant，商品名Surfaxin）用于治療新生兒呼吸窘迫綜合征。蘆西納坦是在西那普肽（sinapultide）的基礎上根據天然人肺表面活性劑的特點設計而成的產品，用于模擬人肺表面活化蛋白B（SP-B）。

西那普肽是一個具有20個氨基酸的多肽分子，其結構序列如SEQ?ID?NO：1所示。

1993年美國專利5260273A利用基因重組技術合成了具有SEQ?ID?NO：1結構的多肽分子，此后一直未見關于西那普肽合成方法的報道。

但是利用基因重組技術對西塔普肽進行合成，操作起來十分困難，且所需時間較長，最重要的是，一旦重組基因DNA分子鏈上的核苷酸發生突變，則會造成肽鏈上相應的氨基酸突變，降低了藥品的純度和使用安全性。

如果采用化學方法通過逐步偶聯的方式合成西那普肽則會避免上述問題，但是由于西那普肽的肽鏈中存在著16個疏水性極強的亮氨酸，加大了偶聯反應操作的難度，從而使逐一偶聯氨基酸合成西那普肽的方法周期加長，而且進行20步氨基酸的偶聯反應會使成本升高，副產物增多，導致純品回收率低。

發明內容

有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供一種西那普肽的化學合成方法，避免產生在逐一偶聯氨基酸制備西那普肽過程中周期長、成本高、副產物多的問題。

本發明提供的西那普肽的化學合成方法，包括以下步驟：

步驟1：制備具有SEQ?ID?NO：2所示結構的多肽片段和具有SEQ?ID?NO：2所示結構的多肽樹脂；

步驟2：取所述具有SEQ?ID?NO：2所示結構多肽樹脂，逐步偶聯所述具有SEQ?ID?NO：2所示結構的多肽片段，偶聯三次后，制得具有SEQ?IDNO：1所示結構的西那普肽樹脂；

步驟3：取所述西那普肽樹脂裂解并純化即得西那普肽。

由于在西那普肽的序列中包含有16個疏水性極強的亮氨酸，而疏水氨基酸的偶聯反應不易發生，如通過逐個偶聯的方式制備西那普肽則會使反應效率的降低，而副產物增多。西那普肽的序列由4個SEQ?ID?NO：2所示的結構順序相連組成，本發明通過合成具有SEQ?ID?NO：2結構的多肽小片段作為合成的中間體，經過3步偶聯反應，合成具有SEQ?ID?NO：1結構的西那普肽樹脂。如此不但減少了偶聯反應次數，更避免了重復偶聯亮氨酸，從而提高了合成效率、降低了副產物的含量、節約了制備成本。

優選地，所述步驟2具體為：

21）取過量的具有SEQ?ID?NO：2所示結構的多肽樹脂，與具有SEQ?IDNO：2所示結構的多肽片段進行偶聯，制得具有SEQ?ID?NO：3所示結構的多肽樹脂；

22）取過量的具有SEQ?ID?NO：2所示結構的多肽片段，與具有SEQ?IDNO：3所示結構的多肽樹脂進行偶聯，制得具有SEQ?ID?NO：4所示結構的多肽樹脂；

23）取過量的具有SEQ?ID?NO：2所示結構的多肽片段，與具有SEQ?IDNO：4所示結構的多肽樹脂進行偶聯，制得具有SEQ?ID?NO：1所示結構的西那普肽樹脂。

優選地，步驟21）中所述的具有SEQ?ID?NO：2所示結構的多肽片段與具有SEQ?ID?NO：2所示結構的多肽樹脂的摩爾比為（3~6）：1，更優選的為（4~6）：1，最優選的為5：1。