[發明專利]一種快速高效刪除質粒上基因片段的方法無效
| 申請號： | 201210345247.8 | 申請日： | 2012-09-18 |
| 公開（公告）號： | CN102899311A | 公開（公告）日： | 2013-01-30 |
| 發明（設計）人： | 周哲敏;杜坤;崔文璟;周麗;葛春蕾 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N15/09 | 分類號： | C12N15/09 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 214122 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 高效 刪除 質粒 基因 片段 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種一步PCR法刪除質粒上基因片段的方法，是采用兩個特異性引物片段，通過一步PCR實現刪除質粒上任意位置基因片段的方法。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于兩個特異性引物的設計，將與刪除片段兩端相連接的一定長度的序列拼接在一起，據此設計成為特異性引物。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，兩個引物擴增方向相向。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，一步PCR法擴增得到目的片段已經被刪除的質粒，不需要重疊PCR、酶切、連接等傳統的構建方法。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，PCR方法與普通PCR方法一致，但PCR延伸時間為延伸整個重組質粒長度的時間，一般含7000bp堿基數的重組質粒延伸時間約為5-8min。
6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，PCR方法與普通PCR方法一致，但PCR擴增循環數一般約為15-20次。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，PCR擴增完成后經DpnI酶消化3h后直接轉化感受態細胞。
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