[發(fā)明專利]一種乳中堿性蛋白的檢測(cè)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210344142.0
• 申請(qǐng)日: 2012-09-17
• 公開（公告）號(hào): CN102866152A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳偉;李志偉;錢文濤;季國志;高增麗;李洪亮;于景華;高連勝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)（集團(tuán)）股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/78
• 分類號(hào): G01N21/78;G01N30/02;G01N27/447;G01N33/68
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務(wù)所 11105
• 代理人: 劉彬

1.一種乳中牛奶堿性蛋白的檢測(cè)方法，所述方法包括以下步驟：

1）乳中酪蛋白及脂肪的沉淀分離；

2）牛奶堿性蛋白的吸附；

3）牛奶堿性蛋白的分離收集；

4）將步驟3）中獲得的牛奶堿性蛋白定量測(cè)定。

2.權(quán)利要求1的方法，其中所述牛奶堿性蛋白是乳鐵蛋白。

3.權(quán)利要求1或2的方法，其中所述酪蛋白和脂肪的沉淀分離包括直接離心分離、酸沉淀結(jié)合離心分離、乙腈沉淀并結(jié)合離心分離，優(yōu)選的是酸沉淀結(jié)合離心的方法。

4.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)的方法，其中所述酸沉淀并結(jié)合離心的方法包括稱取乳，將pH調(diào)節(jié)為3-7，優(yōu)選的是4-6，優(yōu)選的是4.5-5.5，優(yōu)選的是4.6，靜置并離心以去除酪蛋白，獲得第一上清液，將第一上清液調(diào)節(jié)pH為5-8，優(yōu)選地6-7，優(yōu)選地6.5，接著進(jìn)行離心得到第二上清液。

5.權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)的方法，其中所述吸附通過吸附柱進(jìn)行，所述吸附柱為人工填充柱或購買的預(yù)裝柱，所述吸附柱的柱材料選用陽離子交換樹脂，其中優(yōu)選的陽離子交換樹脂為CM?sephrose?FF、CM?sephadex?C50，更優(yōu)選的是CM?sephrose?FF。

6.權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的方法，其中所述吸附選用的緩沖液的pH為6.2-6.8，優(yōu)選地6.5，濃度為0.01-0.03mol/L，優(yōu)選地0.01mol/L，其中所述緩沖液優(yōu)選的是磷酸緩沖液。

7.權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的方法，其中所述分離收集采用含鹽緩沖液洗脫來進(jìn)行，其中收集蛋白的監(jiān)測(cè)采用能夠檢測(cè)蛋白的在線裝置，優(yōu)選為核酸蛋白檢測(cè)器進(jìn)行，收集開始時(shí)間為當(dāng)檢測(cè)到有蛋白物質(zhì)流出，收集終止時(shí)間為當(dāng)?shù)鞍讬z測(cè)儀不能檢測(cè)有蛋白物質(zhì)流出，即監(jiān)測(cè)值的波動(dòng)小于檢出值。

8.權(quán)利要求7的方法，其中所述含鹽緩沖液的鹽濃度為0.5-1.0mol/L，優(yōu)選地1mol/L。

9.權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的方法，其中所述定量測(cè)定通過微量凱氏定氮法、Folin-酚試劑法、考馬斯亮藍(lán)法、雙縮脲法、液相色譜法或毛細(xì)管電泳，優(yōu)選微量凱氏定氮或液相色譜法進(jìn)行。

10.權(quán)利要求9的方法，其中所述液相色譜法以乳鐵蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品，通過將液相獲得圖譜所有的峰面積與乳鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)峰比較進(jìn)行定量。