[發明專利]人類DCX基因在制備膠質瘤放療增敏劑中的應用有效
| 申請號： | 201210340345.2 | 申請日： | 2012-09-14 |
| 公開（公告）號： | CN103127528A | 公開（公告）日： | 2013-06-05 |
| 發明（設計）人： | 劉芬菊;蔣昕;徐媛媛;楊磊 | 申請（專利權）人： | 蘇州大學 |
| 主分類號： | A61K48/00 | 分類號： | A61K48/00;A61P35/00;C12N15/12;C12N15/861;C12N15/66 |
| 代理公司： | 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103 | 代理人： | 陶海鋒 |
| 地址： | 215123 江蘇省*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 人類 dcx 基因 制備 膠質 放療 增敏劑 中的 應用 | ||
1.?人類DCX基因在制備膠質瘤放療增敏劑中的應用。
2.?根據權利要求1所述的應用，其特征在于：通過構建DCX基因表達重組腺病毒載體實現。
3.?根據權利要求2所述的應用，其特征在于：所述重組腺病毒載體的構建方法是：
(1)針對人類DCX基因序列，制備PCR引物，所述PCR引物由
正義引物GCAAGATCTATGAAAACACTCCCCCTTC和
反義引物TAAGGTACCTTACATGGAATCACCAAGCG構成，在DCX兩端分別引入BglII和KpnI酶切位點，擴增得到DCX目的片段；
(2)?雙酶切DCX目的片段和pAdTrack-CMV-polyA-promoter空載體轉移質粒，用T4?DNA連接酶將其4℃連接過夜,連接產物轉化DH5α大腸桿菌,構建單基因重組轉移質粒載體pAdTrack-CMV-DCX-polyA+promoter；
(3)?將構建的單基因重組轉移質粒載體用PmeI單酶切線性化后，與pAdEasy-1腺病毒骨架質粒共轉化BJ5183大腸桿菌，用PacI單酶切鑒定并轉化DH5α大腸桿菌；
(4)將成功重組的pAd-polyA+promoter、pAd-DCX-polyA+promoter在DH5α大腸桿菌擴增抽提，PacI酶切線性化后用脂質體2000轉染293A細胞；
(5)在半數細胞脫壁后，收獲細胞和上清液，反復凍融3次，獲得腺病毒Ad-GFP,Ad-DCX。
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