[發(fā)明專利]可防治流感的siRNA及其藥物組合物、醫(yī)藥用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210336876.4
• 申請(qǐng)日: 2012-09-12
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103667285A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鐘南山;吳東;楊子峰;周榮;關(guān)文達(dá);王玉濤;李海濤;秦笙;李潤(rùn)峰;招惠珊;伍時(shí)冠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州呼吸疾病研究所;吳東
• 主分類號(hào): C12N15/113
• 分類號(hào): C12N15/113;A61K48/00;A61P31/16
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種可防治流感的siRNA及其藥物組合物、醫(yī)藥用途。

背景技術(shù)

流行性感冒病毒簡(jiǎn)稱流感病毒，是一種造成人類及動(dòng)物患流行性感冒的RNA病毒；流感病毒可依據(jù)其中的核蛋白(NP)和基質(zhì)蛋白(M)分為四個(gè)屬:甲型(A)、乙型(B)、丙型(C)和類托高土病毒屬。甲型流感廣泛存在于人類及其他動(dòng)物中，其感染范圍廣，呈流行形式出現(xiàn)，危害也最嚴(yán)重；乙型僅存在于人類，常引起流感的局部爆發(fā)；丙型流感存在于人類和豬中，極少流行。

流感病毒主要通過(guò)感染人類呼吸道上皮細(xì)胞而進(jìn)入宿主體內(nèi)，導(dǎo)致各種全身癥狀，甚至嚴(yán)重的并發(fā)癥！呼吸道上皮細(xì)胞表面的唾液酸分子則作為流感病毒吸附的受體而與流感病毒感染密切相關(guān)。人源的流感病毒偏向于識(shí)別α-2,6-唾液酸鏈接作為受體，而禽源的流感病毒則偏向于α-2,3-唾液酸鏈接作為受體。

唾液酸分子鏈接在細(xì)胞表面的糖蛋白和糖脂的末端，在各組生物學(xué)進(jìn)程（如免疫原識(shí)別、病毒感染和細(xì)胞吸附等）中起重要作用。唾液酸轉(zhuǎn)移酶是一類主要的調(diào)節(jié)細(xì)胞表面的唾液酸分子含量的酶類。人類基因組編碼大約20多種涉及糖蛋白和糖脂唾液酸化的唾液酸轉(zhuǎn)移酶。最新的研究證實(shí)，β-半乳糖α-2,6-唾液酸轉(zhuǎn)移酶I（ST6GAL?I）負(fù)責(zé)將α-2,6-唾液酸加到糖蛋白類聚糖的N-鏈接和一些O-鏈接的GALβ1-4GlcNAc（一種二糖）上；而β-半乳糖α-2,3-唾液酸轉(zhuǎn)移酶IV（ST3GAL?IV）則主要負(fù)責(zé)α-2,3-唾液酸加到糖蛋白類聚糖的N-鏈接和一些O-鏈接的GALβ1-4GlcNAc上。編碼ST6GAL?I和ST3GAL?IV的基因在人類呼吸道高表達(dá)，這提示這兩種酶與流感病毒主要感染人類呼吸道的機(jī)制相關(guān)，并有可能成為預(yù)防和治療流感病毒的靶點(diǎn)。目前已公開(kāi)的有關(guān)研究中，尚未見(jiàn)利用制備靶向ST6GAL1和ST3GAL4基因的siRNA用于抑制多種流感病毒亞型，尤其是減少流感病毒吸附而減少感染的報(bào)道。

????小干擾RNA（siRNA）是一類長(zhǎng)度約為21bp的雙鏈RNA，當(dāng)其被導(dǎo)入細(xì)胞后，會(huì)介導(dǎo)與其序列相對(duì)應(yīng)的mRNA降解，從而起到特異性抑制靶基因表達(dá)，這種現(xiàn)象稱作RNA干擾機(jī)制。近年來(lái)，RNA干擾技術(shù)飛速發(fā)展，被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，包括抗病毒療法方面，例如，已有研究證實(shí)針對(duì)各類病毒的基因（包括HIV、脊髓灰質(zhì)炎病毒、丙型肝炎病毒、西尼羅河病毒和流感病毒）設(shè)計(jì)特異靶向的siRNA可在體內(nèi)外起到有效抗病毒作用。但是針對(duì)流感病毒感染所必需的、宿主本身的基因而設(shè)計(jì)的siRNA進(jìn)行抗病毒的研究則較少報(bào)道。

目前可用于治療和預(yù)防流感病毒的抗病毒藥物主要有神經(jīng)氨酸酶抑制劑?(NAI)?，如奧司他韋和扎那米韋；以及M2離子通道抑制劑金剛烷胺類，包括金剛烷胺和金剛乙胺。但以上兩類化合藥物有著各種副作用以及局限性，如易產(chǎn)生耐藥性等，這也成為臨床治療及新藥開(kāi)發(fā)的重要問(wèn)題。

終上所述，研發(fā)新型的特異性更高、不易產(chǎn)生耐藥性的抗流感藥物成為業(yè)內(nèi)亟待解決的問(wèn)題。同時(shí)，針對(duì)流感病毒感染所必需的基因，設(shè)計(jì)特異性強(qiáng)的靶向型藥物，并進(jìn)行研究和應(yīng)用也成為業(yè)內(nèi)的迫切需要。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明設(shè)計(jì)靶向ST6GAL1和ST3GAL4基因的siRNA，明確其抗病毒效果及其作用機(jī)制，為開(kāi)發(fā)新型的靶向性的siRNA抗流感病毒藥物提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

本發(fā)明的目的之一是提供一種雙鏈siRNA，其可以抑制人呼吸道上皮細(xì)胞表面的人源甲型流感病毒唾液酸受體（SAa2,6GAL）的表達(dá)，從而減少人源甲型流感病毒的吸附與感染。

本發(fā)明的另一目的是提供一種雙鏈siRNA，其可以抑制人呼吸道上皮細(xì)胞表面的禽源甲型流感病毒唾液酸受體（SAa2,3GAL）的表達(dá)，從而減少禽源甲型流感病毒的吸附與感染。

本發(fā)明的另一目的是提供了其活性成份為上述siRNA序列的藥物組合物，用于減少多種流感病毒亞型的吸附而抑制感染。

本發(fā)明的另一目的是提供了所述siRNA的醫(yī)藥用途，用于制備可防治流感病毒的藥物組合物、藥物以及預(yù)防制劑。

針對(duì)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了靶向ST6GAL1和ST3GAL4基因的siRNA，所述siRNA為以下至少一種：

siST6GAL1_001:正義鏈堿基組成為SEQ?ID?NO.1，反義鏈堿基組成為SEQ?ID?NO.2;

siST6GAL1_002:正義鏈堿基組成為SEQ?ID?NO.3，反義鏈堿基組成為SEQ?ID?NO.4;