[發明專利]抗肝素干擾的亮氨酸氨基肽酶測定試劑

無效

• 申請號: 201210335114.2
• 申請日: 2012-09-11
• 公開（公告）號: CN102864206A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發明（設計）人: 鄒炳德;鄒繼華;沃燕波
• 申請（專利權）人: 寧波美康生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務所(普通合伙) 33228
• 代理人: 代忠炯

技術領域

本發明涉及醫學檢驗技術領域，具體涉及一種抗肝素干擾的亮氨酸氨基肽酶測定試劑。

背景技術

亮氨酸氨基肽酶（Leucine?aminopeptidase，LAP，EC?3.4.11.1）是一種蛋白分解酶,能水解肽鏈N端并由亮氨酸與其他氨基酸形成肽鍵的酶,廣泛分布于肝、胰、腎等組織中。當人體肝、膽、胰等組織有病變時,均可出現血清LAP水平升高。測定血清亮氨酸氨基轉肽酶可作為肝病診斷的又一項指標,對淤膽性肝炎的鑒別診斷、肝道梗阻及胰腺癌的診斷有價值。LAP不像其他肝功的酶，只能檢測血液樣本，LAP還可以檢測尿液。在一些病例中可以檢測尿液中LAP的變化，而不必采血。其肝癌的檢出陽性率較ADA（腺苷脫氨酶）高，比GGT（谷酰轉肽酶）反映肝臟疾病更加靈敏。LAP的檢測也可早期反映腎損害的性質和程度，并為臨床鑒別腎小球、腎小管損傷提供可能的幫助；其亦可作為妊娠合并ICP及孕婦和胎兒健康情況動態監測的一項有效指標。

目前，LAP的檢測方法是樣本中的LAP經催化水解底物L-亮氨-P-硝基苯胺，生成亮氨酸和對硝基苯胺，反應系統在405nm處吸光度上升，通過檢測其上升的速率即可得出樣本中LAP的活性。而在日常工作中,為縮短樣本周轉時間和防止儀器樣品針被堵,不少醫院使用肝素鋰或肝素鈉抗凝管采集常規生化項目血樣本。由于肝素在LAP催化反應過程中起類似加速劑的作用，使得檢測結果假性增高，所以實驗室測定LAP濃度只能用血清,而肝癌肝硬化患者分離血清需要時間長,不能滿足臨床對檢驗結果的快速回報要求,這給實驗室及臨床工作帶來許多不便。

發明內容

本發明針對現有技術的上述不足，提供一種具有良好的抗肝素干擾性能和良好的穩定性，能完全滿足臨床檢驗要求的抗肝素干擾的亮氨酸氨基肽酶測定試劑。

為了解決上述問題，本發明采用的技術方案為：一種抗肝素干擾的亮氨酸氨基肽酶測定試劑，該試劑由試劑1和試劑2組成，其中試劑1、試劑2中的各組分及組分濃度范圍為：

試劑1：

緩沖液(pH7.0-8.5)??50-500?mmol/L

抗干擾劑???????????1-100?ml/L

防腐劑?????????????0.1-100?g/L；

試劑2：

本發明上述的試劑可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以制成液體試劑，直接使用；上述試劑的配置均采用行業常規技術。

其中所述緩沖液可以是磷酸緩沖液、三羥甲基氨基緩沖液、甘氨酸-Na0H緩沖液、N-2-羥乙基哌嗪一N’-2-乙磺酸緩沖液、N-三(羥甲基)甲氨基-2-羥基丙磺酸緩沖液、N-三(羥甲基)甲基-2-氨基乙磺酸緩沖液、哌嗪-N，N-雙(2-羥基乙烷磺酸)緩沖液、3-嗎啉-2-羥基丙磺酸鈉緩沖液、3-(N-嗎啡啉)乙磺酸鈉緩沖液、4-(2-羥乙基)哌嗪-1-2-羥基丙磺酸緩沖液、N-(2-羥乙基)哌嗪-N’-4-丁磺酸緩沖液、3-雙(2-羥乙基)氨基-2-羥基丙磺酸緩沖液、3-(環己胺)-2-羥基-1-丙磺酸緩沖液、4-(2-羥乙基)-1-哌嗪丙磺酸緩沖液、3-(環己胺)-1-丙磺酸緩沖液、3-嗎啉丙磺酸緩沖液、N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸緩沖液，檸檬酸一檸檬酸三鈉緩沖液、咪唑緩沖液、醋酸一醋酸鈉緩沖液，2-嗎啉乙磺酸緩沖液中的一種或幾種。

所述防腐劑選白山梨酸鉀、苯甲酸鈉、亞硝酸鈉、疊氮鈉、proclin系列防腐劑(如Proclin300)中的一種或幾種。

所述穩定劑選自聚乙二醇、丙三醇、丙二醇、蔗糖、海藻糖、山梨醇、BSA(牛血清白蛋白)中的一種或者幾種。

所述的抗干擾劑，優選非離子表面活性劑，為更優選地，所述非離子表面活性劑選白TWEEN系列(如Tween20)、SPAN系列(如Span-80)、TRITON系列(如TritonX-100)中的一種。

本發明的突出實質性特點及顯著進步主要表現在：

(1)本發明的試劑為雙試劑，通過試劑l中的抗干擾劑先將樣本中的肝素干擾效應去除，再加入試劑2進行反應，因此本發明試劑具有良好的抗肝素干擾性能。

（2）本發明的試劑通過加入選定的穩定劑，使得試劑具有良好的穩定性：本發明試劑盒2-8℃避光保存至少穩定12個月，能完全滿足臨床檢驗要求。

具體實施方式

下面將通過下述非限制性實施例進一步說明本發明，本領域技術人員公知，在不背離本發明精神的情況下，可以對本發明作出許多修改，這樣的修改也落入本發明的范圍。