[發(fā)明專(zhuān)利]一種香菇華香5號(hào)菌種的SSR標(biāo)記指紋圖譜與應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210333257.X
• 申請(qǐng)日: 2012-09-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102851374A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鮑大鵬;譚琦;尚曉冬;宋春艷;楊慧;張丹;章?tīng)t軍;巫萍
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 上海泰能知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 31233
• 代理人: 黃志達(dá);謝文凱

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于香菇菌種的檢測(cè)領(lǐng)域，特別涉及一種香菇華香5號(hào)菌種的SSR標(biāo)記指紋圖譜與應(yīng)用。

背景技術(shù)

我國(guó)香菇產(chǎn)量已從1983年的1.95萬(wàn)噸迅速發(fā)展到2005年的242萬(wàn)噸，占全球香菇總產(chǎn)量的70%以上，改寫(xiě)了世界食用菌產(chǎn)量的排行榜，并不斷縮小與排行第一的雙孢蘑菇產(chǎn)量差距，有專(zhuān)家預(yù)測(cè)，由于中國(guó)香菇產(chǎn)業(yè)的迅猛發(fā)展，在近10年內(nèi)其將成為世界產(chǎn)量最高的食用菌。中國(guó)香菇以其驚人的發(fā)展速度，優(yōu)質(zhì)的品質(zhì)及低廉的成本為世界菇業(yè)人士矚目，中國(guó)香菇已風(fēng)靡世界。

優(yōu)質(zhì)菌種在香菇單產(chǎn)和質(zhì)量中的貢獻(xiàn)率舉足輕重，這決定了香菇菌種在香菇產(chǎn)業(yè)中的重要地位。1999年我國(guó)簽署了《國(guó)際植物新品種保護(hù)法》，這不僅要求我們尊重其它國(guó)家的品種知識(shí)產(chǎn)權(quán)，同時(shí)也要加強(qiáng)保護(hù)我們國(guó)家自己的品種知識(shí)產(chǎn)權(quán)，為了建立食用菌新品種登記制度來(lái)真正保護(hù)我國(guó)的品種產(chǎn)權(quán)，必須首先建立成熟的品種鑒定技術(shù)，為新品種登記奠定基礎(chǔ)。尤其日本2004年4月1日開(kāi)始實(shí)行《種苗法修正案》，對(duì)我國(guó)食用菌尤其是香菇的出口構(gòu)成了極大的威脅。就國(guó)內(nèi)而言，香菇栽培菌種“同種異名，異種同名”的現(xiàn)象，不僅給菇農(nóng)帶來(lái)了極大的損失，影響了他們的栽培積極性，也極大地影響了中國(guó)香菇的快速發(fā)展；而且，隨著大規(guī)模的工廠化栽培方式的出現(xiàn)，對(duì)香菇栽培菌株質(zhì)量的要求越來(lái)越高，需要發(fā)展更為簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確的菌株鑒定技術(shù)，以保證每批次的用種都準(zhǔn)確無(wú)誤。

面對(duì)這種局勢(shì)，就需要我們進(jìn)一步加快菌種鑒定技術(shù)的研究，在香菇的研究中引進(jìn)更為有效的菌種鑒定體系。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種香菇華香5號(hào)菌種的SSR標(biāo)記指紋圖譜及其構(gòu)建方法與應(yīng)用，該指紋圖譜與常規(guī)形態(tài)學(xué)檢測(cè)、拮抗試驗(yàn)、出菇試驗(yàn)相比，具有檢測(cè)時(shí)間短，準(zhǔn)確性高，重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。

本發(fā)明的一種香菇華香5號(hào)菌種的SSR標(biāo)記指紋圖譜，該指紋圖譜由7對(duì)SSR標(biāo)記組成，是基于香菇基因組簡(jiǎn)單重復(fù)序列片段開(kāi)發(fā)SSR引物，擴(kuò)增帶型好，重復(fù)性高的SSR引物，標(biāo)記詳細(xì)信息如表1。

表1SSR標(biāo)記詳細(xì)信息列表

本發(fā)明的一種香菇華香5號(hào)菌種的SSR標(biāo)記指紋圖譜的應(yīng)用，是利用香菇基因組簡(jiǎn)單重復(fù)序列片段開(kāi)發(fā)的7對(duì)SSR引物，通過(guò)對(duì)收集的25份國(guó)審香菇栽培品種的SSR引物帶型擴(kuò)增，本發(fā)明確定了7對(duì)SSR引物在香菇華香5號(hào)菌種中擴(kuò)增出的等位片段的數(shù)量并編號(hào)（表2），通過(guò)不同SSR等位片段的編號(hào)組合可有效識(shí)別華香5號(hào)菌種（圖2-8）。通過(guò)對(duì)照50bp?DNAladder可確定各SSR引物擴(kuò)增的等位片段的相對(duì)分子量，存在華香5號(hào)菌種特異SSR等位片段組合的菌種，即是香菇華香5號(hào)菌種，該菌種的編號(hào)組合為：1（1+4）1（1+2）121。

表2SSR引物擴(kuò)增的等位片段信息匯總表

有益效果

本發(fā)明與常規(guī)形態(tài)學(xué)檢測(cè)、拮抗試驗(yàn)、出菇試驗(yàn)相比，具有檢測(cè)時(shí)間短，準(zhǔn)確性高，重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。檢測(cè)所需時(shí)間只需要3~4天，而常規(guī)的拮抗試驗(yàn)所需時(shí)間至少需要兩周時(shí)間，出菇試驗(yàn)則需要至少3個(gè)月的時(shí)間；該方法在所收集的我國(guó)25個(gè)通過(guò)國(guó)審的香菇主栽菌種中具有華香5號(hào)菌種的專(zhuān)一性，具有良好的應(yīng)用前景。

附圖說(shuō)明

圖1為香菇華香5號(hào)菌種SSR標(biāo)記指紋圖譜，其中M是50bp?DNA?ladder，數(shù)字代表的是所用的7對(duì)SSR引物，NC是空白對(duì)照，箭頭所指的是香菇華香5號(hào)菌種的特異性SSR等位片段組合；

圖2為引物L(fēng)e_fp0001在所選國(guó)審香菇栽培材料中的擴(kuò)增圖譜；

圖3為引物L(fēng)e_fp0002在所選國(guó)審香菇栽培材料中的擴(kuò)增圖譜；

圖4為引物L(fēng)e_fp0003在所選國(guó)審香菇栽培材料中的擴(kuò)增圖譜；

圖5為引物L(fēng)e_fp0004在所選國(guó)審香菇栽培材料中的擴(kuò)增圖譜；

圖6為引物L(fēng)e_fp0005在所選國(guó)審香菇栽培材料中的擴(kuò)增圖譜；

圖7為引物L(fēng)e_fp0006在所選國(guó)審香菇栽培材料中的擴(kuò)增圖譜；

圖8為引物L(fēng)e_fp0007在所選國(guó)審香菇栽培材料中的擴(kuò)增圖譜。

具體實(shí)施方式