[發(fā)明專利]轉BAR基因農(nóng)作物的可視化檢測方法

有效

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• 申請日: 2012-09-11
• 公開（公告）號: CN102787175A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發(fā)明（設計）人: 唐卓;余懋群;陳蓉;龍海
• 申請（專利權）人: 中國科學院成都生物研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明屬于基因工程技術領域，涉及一種轉基因農(nóng)作物的檢測技術，具體涉及轉BAR基因農(nóng)作物的可視化檢測方法。

背景技術

轉基因農(nóng)作物是利用組織培養(yǎng)技術和基因重組技術引入其它生物或物種的基因而培育出來的，這種農(nóng)作物往往具有抗病蟲害、抗除草劑或者營養(yǎng)高于非轉基因作物等特性。目前中國的轉基因植物已經(jīng)超過20種，其中轉基因大豆、馬鈴薯、玉米、煙草、花生、菠菜、甜椒、小麥等進行了田間試驗，轉基因棉花已經(jīng)大規(guī)模應用，國外轉基因大豆等也大量進入我國。雖然轉基因作物有諸多優(yōu)勢，但是轉基因農(nóng)作物的安全性問題以及轉基因作物對生態(tài)環(huán)境的潛在影響，仍然是我們必須謹慎對待的問題。特別是對于國外進口的產(chǎn)品，更應該確定其是否為轉基因產(chǎn)品。

目前轉基因產(chǎn)品的檢測方法根據(jù)檢測靶標的不同可分為基于核酸(DNA)的檢測方法和基于外源蛋白質的檢測方法。其中以第一類方法使用較為廣泛，基于核酸的檢測方法主要是建立在熒光定量PCR之上的檢測方法，熒光定量PCR有很多優(yōu)勢，包括靈敏度高，特異性性高，既可定性又可定量等，但是其所需要用的儀器設備，以及熒光探針的檢測成本都要遠遠高于普通PCR。本發(fā)明利用DNAzyme的特性，可以建立一種基于普通PCR反應的可視化檢測方法，同時這種非標記的探針成本也大大下降，顯色反應的操作也非常簡單方便，可以實現(xiàn)高通量，多樣本的檢測。

BAR基因是一種來自于吸水鏈霉菌的抗除草劑基因，它在作為抗除草劑基因使用的同時，也被廣泛地用作顯性的選擇標記，在現(xiàn)有的轉基因產(chǎn)品中含有BAR基因的轉基因作物的數(shù)量是非常可觀的，這也預示著研究高效、簡單的轉BAR基因農(nóng)作物檢測方法具有廣闊的應用前景。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種轉基因農(nóng)作物的檢測方法。

本發(fā)明上述方法是利用在PCR體系中加入DNAzyme標記的檢測BAR基因的特異性探針CCCTACCCAGTTCCTGCGGCTCGGTACGGAAGTTGACCTGGGTAGGGCGGGTTGGGAAA-NH2，用正反引物(BAR-2：GCACCATCGTCAACCACTACATC?BAR-6：GAGGTCGTCCGTCCACTC)對BAR基因進行擴增，利用核酸聚合酶5’-3’外切酶活性將探針中的DNAzyme標記釋放，通過檢測PCR產(chǎn)物中釋放出的標記物來判斷該樣品是否為轉基因樣品。

本發(fā)明上述方法包括下列步驟：

DNA的提取；

PCR反應：

顯色反應。

本發(fā)明具有明顯優(yōu)于現(xiàn)有技術的優(yōu)點，其主要優(yōu)點包括：

1.快速性。采用本發(fā)明方法檢測十分快速，3-4小時即可得知檢測結果。

2.通用性。本發(fā)明所涉及的PCR檢測方法，對于含有BAR基因的不同樣品均可檢測。

實用性。現(xiàn)有的實時熒光PCR技術通常對檢測設備具有較高的要求，從而使檢測具有一定的局限性，而本發(fā)明檢測方法僅需要普通PCR儀，因此，使得轉基因產(chǎn)品的檢測變得更加簡單、實用、方便。

經(jīng)濟性。現(xiàn)有的實時熒光PCR技術，試劑和探針的合成費用都較高，而本發(fā)明中所涉及的探針序列和標記物都由普通的核苷酸組成，不用修飾和改性，合成方便，試劑較為廉價，因此，大大降低了檢測成本。

對于含有轉BAR基因的轉基因作物，只要檢測到BAR基因的存在，就可以判斷該樣品是轉基因產(chǎn)品。所以本方法可以為海關，出入境檢驗檢疫局、商檢、食品藥品的監(jiān)督管理等提供一種高效、簡便且成本合理的轉基因產(chǎn)品的檢測技術。

附圖說明

圖1是轉BAR基因水稻的檢測結果，其中：1為陰性對照，為非轉基因水稻，檢測結果為無色；2為轉基因水稻，檢測結果為綠色；3為陽性對照，含BAR基因質粒，檢測結果為綠色。

圖2是轉BAR基因棉花的檢測結果，其中：1為陰性對照，為非轉基因棉花，檢測結果為無色；2為轉基因棉花，檢測結果為綠色；3為陽性對照，含BAR基因質粒，檢測結果為綠色。

具體實施方式

下面將結合附圖舉例說明本發(fā)明的方法。

實施例1：水稻中BAR基因的檢測

1.水稻基因組DNA的提取；