[發明專利]微生物發酵產丙酸及其鹽聯產丁二酸及其鹽的方法

有效

• 申請號: 201210324601.9
• 申請日: 2012-09-05
• 公開（公告）號: CN103667373A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 盧雪峰;王劍英;張清輝;林智;賈佳
• 申請（專利權）人: 深圳市綠微康生物工程有限公司
• 主分類號: C12P7/52
• 分類號: C12P7/52;C12P7/46;C12R1/01
• 代理公司: 深圳市萬商天勤知識產權事務所(普通合伙) 44279
• 代理人: 王志明

1.一種微生物發酵產丙酸及其鹽聯產丁二酸及其鹽的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)菌種培養：取適量生產用丙酸桿菌菌種，接入含種子培養基的厭氧瓶中，在厭氧箱中靜置培養36～72h；

(2)種子培養：取步驟(1)培養好的厭氧瓶菌種接入含種子培養基的種子罐中，充入無菌氮氣攪拌培養36～72h；

(3)生產發酵：取步驟(2)培養好的丙酸桿菌無菌接入含基礎發酵培養基的發酵罐中，充入無菌氮氣攪拌培養；根據發酵液pH值的變化流加10～40％的碳酸鹽溶液，控制發酵液pH值在6.0～8.0之間；發酵培養36h后，當發酵罐中甘油的量降至15g/L以下時，以10～50mL/h/L的流加速度流加經過滅菌處理的20～50％甘油水溶液至發酵全程；發酵192～288h，甘油不再消耗、pH值不再變化、丙酸含量達到45g/L以上、丁二酸含量達到15g/L以上時發酵結束；

(4)丙酸鹽和丁二酸鹽的提?。簩⒉襟E(3)發酵結束后的發酵液經過壓濾機過濾、取濾液，在結晶器中分離丙酸鹽和丁二酸鹽，離心收集晶體，分別送入旋轉閃蒸干燥器中干燥，干燥后的粉劑即為丙酸鹽制品和丁二酸鹽制品。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)菌種培養：取適量生產用丙酸桿菌菌種，分別接入4～6只2500mL內裝種子培養基2000mL的厭氧瓶中，在30～32℃下，厭氧箱中靜置培養36～72h；OD₆₀₀＝1.0～2.0，pH值5.5～6.0；

(2)種子發酵：取步驟(1)培養好的厭氧瓶菌種接入1m³不銹鋼種子罐中，在30～32℃下，充入無菌氮氣攪拌培養36～72h，通氣量0.1～0.2vvm，罐壓0.02～0.03mpa，攪拌速率50～100rpm；

(3)生產發酵：取步驟(2)培養好的丙酸桿菌無菌接入含基礎發酵培養基的50m³發酵罐中；在30～32℃下，充入無菌氮氣攪拌培養，通氣量0.1～0.2vvm，罐壓0.02～0.03mpa，攪拌速率50～100rpm；根據發酵液pH值的變化流加10～40％的碳酸鹽溶液，控制發酵液pH值在6.0～8.0之間；發酵培養36h后，當發酵罐中甘油的量降至15g/L以下時，以10～50mL/h/L的流加速度流加經過滅菌處理的20～50％甘油水溶液至發酵全程；發酵192～288h，甘油不再消耗、pH值不再變化、丙酸含量達到45g/L以上、丁二酸含量達到15g/L以上時發酵結束；

(4)丙酸鹽和丁二酸鹽的提取：將步驟(3)發酵結束后的發酵液經過壓濾機過濾、取濾液，在結晶器中分離丙酸鹽和丁二酸鹽，離心收集晶體，分別送入旋轉閃蒸干燥器中干燥，干燥后的粉劑即為丙酸鹽制品和丁二酸鹽制品。

3.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述種子培養基按重量體積比計，由以下成分組成：0.5～2.0％甘油、1～3％酵母膏、0.5～2％豆餅粉、0.1～0.5％磷酸氫二鉀、0.1～0.5％磷酸二氫鉀、余量為水。

4.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述基礎發酵培養基按重量體積比計，由以下成分組成：1～6％甘油、1～3％酵母膏、0.5～2％豆餅粉、0.5～1.0％碳酸鈣，0.1～0.5％磷酸氫二鉀、0.1～0.5％磷酸二氫鉀、余量為水。

5.如權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述碳酸鹽為碳酸鈣或碳酸鈉。