[發明專利]檢測Y染色體微缺失的實時熒光定量PCR試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201210323595.5
• 申請日: 2012-09-04
• 公開（公告）號: CN102876776A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 駱子義;鄔宇美
• 申請（專利權）人: 駱子義;鄔宇美
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 向武橋

技術領域

本發明涉及一種檢測Y染色體微缺失的試劑盒及方法。

背景技術

據統計，全世界有15％的夫婦患有不育（孕）癥，其中50％以上由男方所致。近年來研究表明30％以上的男性不育是由于遺傳因素引起的生精障礙，通常表現為男性Y染色體長臂（q臂）11區上無精因子基因家族（Azoospermia?factor，AZF）多個位點的缺失突變，其中任何一個座位的微缺失都可導致生精障礙，而對于因Y染色體微缺失引起的男性不育是無法治療的。在胞質內單精子注射（ICSI）技術輔助生育治療前檢測Y染色體微缺失可以為臨床治療提供指導，減少不必要的經濟浪費。目前歐洲、美國及我國相關學會已經建議將檢測Y染色體微缺失列為男性不育的篩查項目。

目前檢測基因微缺失的方法很多，最常用的PCR-RFLP法，另外還有反向點雜交法、等位基因特異性聚合酶鏈反應、直接測序法等。后者是所有方法的金標準，但由于其費用昂貴，未廣泛使用。而PCR-RFLP法雖然費用較低，操作簡單，但特異性和敏感性都不太理想，其檢測通量小，對于樣本量較大的臨床檢測不適用。

發明內容

本發明提供一種能夠有效減少時間和成本的用于檢測Y染色體微缺失的試劑盒及方法。

本發明提供一種用于檢測Y染色體微缺失的實時熒光PCR試劑盒，包括盒體、PCR反應液及至少一個引物探針組合，所述引物探針組合選自用于檢測SY84位點的SY84引物探針組合、用于檢測SY86位點的SY86引物探針組合、用于檢測SY127位點的SY127引物探針組合、用于檢測SY134位點的SY134引物探針組合、用于檢測SY254位點的SY254引物探針組合及用于檢測SY255位點的SY255引物探針組合，其中，

SY84引物探針組合的上游引物如SEQ?ID?NO:1~SEQ?ID?NO:8中之一所示，其下游引物如SEQ?ID?NO:9~SEQ?ID?NO:14中之一所示，其熒光探針如SEQ?IDNO:15~SEQ?ID?NO:22中之一所示；

SY86引物探針組合的上游引物如SEQ?ID?NO:23~SEQ?ID?NO:28中之一所示，其下游引物如SEQ?ID?NO:29~SEQ?ID?NO:30中之一所示，其熒光探針如SEQ?ID?NO:31~SEQ?ID?NO:39中之一所示；

SY127引物探針組合的上游引物如SEQ?ID?NO:40~SEQ?ID?NO:51中之一所示，其下游引物如SEQ?ID?NO:52~SEQ?ID?NO:54中之一所示，其熒光探針如SEQ?ID?NO:55~SEQ?ID?NO:58中之一所示；

SY134引物探針組合的上游引物如SEQ?ID?NO:59~SEQ?ID?NO:61中之一所示，其下游引物如SEQ?ID?NO:62~SEQ?ID?NO:69中之一所示，其熒光探針如SEQ?ID?NO:70~SEQ?ID?NO:74中之一所示；

SY254引物探針組合的上游引物如SEQ?ID?NO:75~SEQ?ID?NO:76中之一所示，其下游引物如SEQ?ID?NO:77~SEQ?ID?NO:85中之一所示，其熒光探針如SEQ?ID?NO:86~SEQ?ID?NO:87中之一所示；

SY255引物探針組合的上游引物如SEQ?ID?NO:88~SEQ?ID?NO:90中之一所示，其下游引物如SEQ?ID?NO:91~SEQ?ID?NO:94中之一所示，其熒光探針如SEQ?ID?NO:95~SEQ?ID?NO:101中之一所示。

不同的引物探針組合用于檢測Y染色體AZF區域的不同位點，可以根據需要選擇檢測其中的一個或多個位點，對應的，選擇與該位點對應的引物探針組合。

Y染色體的AZF區域由AZFa區域、AZFb區域和AZFc區域組成。

所述試劑盒還包括用于檢測男性性別決定基因SRY的SRY引物探針組合，所述SRY引物探針組合的上游引物如SEQ?ID?NO:102~SEQ?ID?NO:107中之一所示，其下游引物如SEQ?ID?NO:108~SEQ?ID?NO:109中之一所示，其熒光探針如SEQ?ID?NO:110~SEQ?ID?NO:112中之一所示。

SRY引物探針組合用于質控，其可以根據檢測要求選擇采用或不采用。