[發(fā)明專利]大蒜中蒜氨酸酶的掃頻超聲輔助提取方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210322824.1
• 申請日: 2012-09-04
• 公開（公告）號: CN102851271A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬海樂;何榮海;黃六容;任曉鋒;曹麗娟
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品加工領(lǐng)域，特指利用掃頻超聲波技術(shù)輔助提取鮮大蒜中蒜氨酸酶的方法。

背景技術(shù)

超聲提取法是利用超聲波增大物質(zhì)分子運(yùn)動頻率和速度，增加溶劑穿透力，提高溶質(zhì)溶出速度和溶出次數(shù)，縮短提取時間的浸提方法。它利用了超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈振動、高加速度和空化現(xiàn)象等效應(yīng)，加速目標(biāo)物進(jìn)入提取溶劑，縮短提取時間并節(jié)省溶劑用量。掃頻超聲波即聲波圍繞中心頻率以特定的周期變化，使介質(zhì)發(fā)生更復(fù)雜的物理化學(xué)變化，并有效促進(jìn)目標(biāo)物質(zhì)的溶出。

大蒜瓣中的蒜氨酸酶(Alliinase,?EC?4.4.1.4)是含有兩個相同亞基的二聚體，以(+S)-烯丙基-L-半胱氨酸晶體的形式存在，形成樹突狀單斜晶體。蒜氨酸酶是一種PLP(5’-磷酸吡哆醛)依賴性α,β-限制酶，其活性取決于PLP輔基。PLP-依賴性蛋白在氮和含硫化合物的吸收和代謝轉(zhuǎn)換過程中發(fā)揮舉足輕重的作用，參與了消除、交換和縮聚等各種各樣的反應(yīng)，特別是在含有α，β和γ碳原子的氨基酸及其他含氨基化合物參與的反應(yīng)中。大蒜中蒜氨酸酶的活性在36℃左右最大，42℃以上活性逐漸降低。這種酶對pH較為敏感，保持活性所需的最適pH為6.5左右，pH<3.6時，活性幾乎完全喪失。生蒜遭到損壞后，細(xì)胞膜破裂，蒜氨酸酶便催化大蒜中存在的蒜氨酸分解后生成蒜素這種擁有特殊氣味的化合物，這也是大蒜具有許多生物活性功能的原因，所以蒜氨酸酶的產(chǎn)量對于能否生產(chǎn)出優(yōu)質(zhì)的大蒜制品至關(guān)重要，而目前對于其生產(chǎn)還沒有工業(yè)化生產(chǎn)的報道。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一種高效的從大蒜中提取蒜氨酸酶的方法，以滿足醫(yī)藥和保健品行業(yè)對蒜氨酸酶的需求。為達(dá)到該目的，本發(fā)明以鮮大蒜為原料，采用掃頻超聲輔助提取蒜氨酸酶的技術(shù)方案包括如下步驟：

大蒜中蒜氨酸酶的掃頻超聲輔助提取方法，按照下述步驟進(jìn)行：

將鮮大蒜去皮、清洗后放置于低溫冰箱(0~5℃)冷藏12?h，加入預(yù)冷的浸提液于預(yù)冷的組織搗碎機(jī)中破碎勻漿，調(diào)節(jié)pH后勻漿液裝入塑料袋密封，放置于掃頻超聲設(shè)備中進(jìn)行單頻或雙頻掃頻超聲處理，超聲提取結(jié)束后，四層紗布過濾，棄去蒜渣收集濾液，濾液于4℃下10,000?g離心20?min，上清液冷凍干燥即蒜氨酸酶粗制品。

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????上述方案所述的掃頻設(shè)備上下振板的頻率范圍為22±2?kHz～68±2?kHz，單頻處理只使用下振板，雙頻處理使用上下振板，每升處理液超聲功率均為8?W，掃頻周期10~100?ms，超聲工作總時間10～50?min，超聲工作/間歇時間比0.5:1～10:1。

上述方案所述的勻漿液的pH范圍為6～8，用1?M?NaOH或1?M?HCl調(diào)節(jié)。

上述方案所用的浸提液為磷酸緩沖液，由Na₂HPO₄、KH₂PO₄，甘油，NaCl和水配制而成。

??本發(fā)明的優(yōu)點是：采用掃頻超聲技術(shù)輔助提取大蒜中的蒜氨酸酶，高效無污染，最大限度的提取了大蒜中的蒜氨酸酶。

具體實施方式

本發(fā)明中的蒜氨酸酶活力的測定方法如下：取1?mL標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系，該標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系由60?mmol/L緩沖液?(KH₂PO₄和Na₂HPO₄)、25?mmol/L?PLP和20?mmol/L蒜氨酸組成，其pH為6.5。于25℃下保溫5?min，加入0.05?mL蒜氨酸酶液，25℃條件下反應(yīng)5?min，立即加入1.5?mL?10%三氯乙酸終止反應(yīng)，再加入0.5?mL的2,4-二硝基苯肼溶液，25℃條件下保溫5?min，之后加入5?mL?0.5?mol/L?NaOH溶液，25℃下保溫10?min，于波長520?nm處測吸光值，以空氣為空白對照。酶活性定義：在25℃條件下，以蒜氨酸為底物。在催化反應(yīng)過程中，每毫升提取液每分鐘產(chǎn)生1?μmol丙酮酸所含的酶量定義為1?U。

下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述，但發(fā)明的實施方式不限于此。

實施例1