[發明專利]鑒定人MTHFR基因C677T多態性的引物、試劑盒及方法

無效

• 申請號: 201210319117.7
• 申請日: 2012-08-31
• 公開（公告）號: CN102851365A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 唐愛發;張小悅;蔡志明
• 申請（專利權）人: 唐愛發;張小悅;蔡志明
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 深圳鼎合誠知識產權代理有限公司 44281
• 代理人: 向武橋

技術領域

本申請涉及鑒定人MTHFR基因C677T多態性的引物、試劑盒及方法。

背景技術

MTHFR基因(登錄號NM_005957)最常見突變是677C→T的突變，這個突變會影響MTHFR酶的活性。MTHFR酶是同性半胱氨酸(Hcy)代謝過程中的重要酶之一，MTHFR酶活性降低會導致Hcy濃度在體內升高。Hcy是一種血管損傷性氨基酸，其濃度升高可導致血管內皮損傷進而導致動脈粥樣硬化的發生。研究發現MTHFR基因C677T的多態性與腦血管病患者的血清Hcy及葉酸含量有確定關系。

發明內容

本申請提供一種能夠鑒定MTHFR基因C677T多態性的引物、試劑盒及方法。

本申請提供一種鑒定人MTHFR基因C677T多態性的引物，包括上游引物和下游引物，所述上游引物的序列是SEQ?ID?NO:1所示的序列和/或SEQ?ID?NO:2所示的序列，所述下游引物的序列是SEQ?ID?NO:3所示的序列。

進一步的，所述上游引物的序列是SEQ?ID?NO:1所示的序列和SEQ?ID?NO:2所示的序列。

一種鑒定人MTHFR基因C677T多態性的試劑盒，包括第一對引物和第二對引物，所述第一對引物的上游引物的序列如SEQ?ID?NO:1所示，所述第二對引物的上游引物的序列如SEQ?ID?NO:2所示，所述第一、二對引物的下游引物的序列均如SEQ?ID?NO:3所示。

一種鑒定人MTHFR基因C677T多態性的方法，使用所述的引物。

進一步的，對于序列分別如SEQ?ID?NO:1、SEQ?ID?NO:3所示的上、下游引物，其擴增產物的序列如SEQ?ID?NO:4所示；對于序列分別如SEQ?ID?NO:2、SEQ?ID?NO:3所示的上、下游引物，其擴增產物的序列如SEQ?ID?NO:5所示。

一種鑒定人MTHFR基因C677T多態性的方法，包括如下步驟：

a)獲取待測人基因組DNA；

b)分別使用第一對引物和第二對引物，以所述待測人基因組DNA為模板，進行PCR擴增反應，分別獲得第一、二擴增產物；其中，所述第一對引物的上游引物的序列如SEQ?ID?NO:1所示，所述第一對引物的下游引物的序列如SEQID?NO:3所示；所述第二對引物的上游引物的序列如SEQ?ID?NO:2所示，所述第二對引物的下游引物的序列如SEQ?ID?NO:3所示；

c)分別對所述第一、二擴增產物進行電泳，得到多態性鑒定結果。

進一步的，所述第一擴增產物的序列如SEQ?ID?NO:4所示，所述第二擴增產物的序列如SEQ?ID?NO:5所示。

本申請的有益效果是：1)通過設計特定的引物，能夠對MTHFR基因677位點是否突變進行鑒定，進而區分出是野生型、雜合型還是突變型。2)PCR擴增后直接電泳，從而簡化了鑒定步驟，使操作更加簡單，且降低了成本。

附圖說明

圖1是本發明的電泳結果圖。

具體實施方式

下面通過具體實施方式結合附圖對本發明作進一步詳細說明。

本發明通過ARMS-PCR技術來鑒定患者基因組中MTHFR基因C677T多態性，其在PCR反應后直接進行電泳即可區分出野生型(CC型)、雜合型(CT型)和突變型(TT型)。

根據MTHFR基因序列設計了兩對引物，該兩對引物均能夠用來擴增MTHFR基因677位點附近序列，該兩對引物分別定義為第一對引物和第二對引物。

第一對引物的上游引物的序列為：GAAGGTGTCTGCGGGCG(SEQ?IDNO:1)，該序列是用來鑒定MTHFR基因677位點為C的序列(即677位點未突變)。

第二對引物的上游引物的序列為：AGAAGGTGTCTGCGGGCG(SEQ?IDNO:2)，該序列是用來鑒定MTHFR基因677位點為T的序列(即677位點由C突變為T)。

第一、二對引物的下游引物的序列均為：TGGGAAAGATCCCGGGGACG(SEQ?ID?NO:3)。

上述各序列中，斜體標記堿基(兩個上游引物序列的最后一個堿基)為與待測模板相配對堿基；帶下劃線堿基為額外錯配堿基，目的是進一步增加鑒定的特異性。

本發明鑒定MTHFR基因C677T多態性的方法，包括如下步驟：

1)提取DNA