[發明專利]一種整形美容用脂肪干細胞新技術

無效

• 申請號: 201210318746.8
• 申請日: 2012-08-31
• 公開（公告）號: CN103667185A
• 公開（公告）日: 2014-03-26
• 發明（設計）人: 孫勇
• 申請（專利權）人: 孫勇
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種整形美容用脂肪干細胞新技術，其特征在于：

(1)脂肪組織的采集，無菌條件下抽取脂肪組織，于4°條件下運至GMP車間。

(2)脂肪組織的消化，用膠原酶消化脂肪組織并用含血清的培養基中止。

(3)脂肪細胞純化，將消化液行100微米濾網過濾，并離心得到脂肪細胞和脂肪干細胞。

(4)脂肪干細胞純化，重懸細胞沉淀，接種培養板分離純化干細胞。

(5)脂肪干的擴增培養，將第三步得到的脂肪細胞和脂肪干細胞擴增培養，質檢合格豐胸。

(6)干細胞凍存，干細胞加入二甲基亞砜后存入液氮罐。

2.根據權利要求1所述的一種整形美容用脂肪干細胞新技術，其特征是：(1)脂肪組織的采集，在無菌條件下，吸取健康自愿者皮下脂肪，同時抽取靜脈血60毫升(用于干細胞擴增培養之用)。用PBS洗去脂肪組織中的血細胞，加入1％雙抗，低溫運至G?M?P車間。

3.根據權利要求1所述的一種整形美容用脂肪干細胞新技術，其特征是：(2)脂肪組織的消化，在100級GMP廠房條件下，用0.075％I型膠原酶低速37℃恒溫振蕩(50rpm)消化40分鐘，等量體積的完全培養基(高糖DMEM+10％胎牛血清+1％雙抗)中止消化。

4.根據權利要求1所述的一種整形美容用脂肪干細胞新技術，其特征是：(3)脂肪細胞純化，將消化液吹打10-15次后，加入10mg/L?Dnase?I孵育10-15分鐘，行100微米濾網過濾，去除塊狀脂肪組織和結締組織，4°環境1000rpm?10min后去除上層油滴，將漂浮的脂肪細胞轉移至新的離心管中，PBS洗滌2-3次。

5.根據權利要求1所述的一種整形美容用脂肪干細胞新技術，其特征是：(4)脂肪干細胞純化，用1％的鹽水再次洗滌細胞沉淀2-3次，接種于多聚鳥氨酸包被的培養板，培養4小時后用0.25％胰酶消化，難以消化的其它細胞將被留下。分離純化的干細胞進行表面標記CD29、CD44、CD105和CD34、CD45檢測，以及CFU-F檢測，經相關質檢(細胞活力、數量、微生物)合格后用于面部除皺之用。

6.根據權利要求1所述的一種整形美容用脂肪干細胞新技術，其特征是：(5)脂肪干的擴增培養，將第三步得到的脂肪細胞與脂肪干細胞置于300毫升細胞培養袋(細胞密度：100，000cells/ml)，用DMEM培養基加5％人血清及相關細胞因子(10ng/ml?ITS(胰島素、轉鐵蛋白、硒)，100u/ml青霉素，100u/ml鏈霉素，20ng/ml?of?rEGF，10ng/ml?of?LIF，20ng/ml?of?bFGF)培養增殖干細胞7-10天后，進行質檢(細胞活力、數量、內毒素、微生物)，合格者用于豐胸。

7.根據權利要求1所述的一種整形美容用脂肪干細胞新技術，其特征是：(6)干細胞凍存，將干細胞置于細胞凍存管，加入凍存液：8％二甲基亞砜、10％BSA、20％胎牛血清、62％DMEM，先后置4°、-20°預冷，再入液氮中儲存。