[發明專利]熒光假單胞菌催化胞苷類化合物羥基保護反應的方法

有效

• 申請號: 201210318062.8
• 申請日: 2012-08-31
• 公開（公告）號: CN102851336A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 李曉鳳;馮廣莉;吳暉;趙光磊;余以剛
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12P19/38
• 分類號: C12P19/38;C12R1/39
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 何淑珍

技術領域

本發明屬于生物催化及有機合成領域，具體涉及一種熒光假單胞菌催化胞苷類化合物5′-羥基保護反應的方法。

背景技術

對多官能團化合物的特定基團進行保護是在有機合成中的常見步驟,?通過該反應方法可以將不希望參與反應的一些活性基團如羰基、羥基、氨基等加以保護,?使此類基團暫時被致鈍，不影響后續反應。此外，有機合成中的基團保護反應也是提高反應選擇性的重要策略之一,?通過鈍化某些基團可以提高反應的區域選擇性,?甚至可實現立體選擇性。

胞苷類化合物是典型的多羥基化合物，也是食品及醫藥領域的一類重要化合物，其糖環上一般含有2-3個羥基，按它們在糖環上位置的不同，可分為伯羥基（5'-羥基）和仲羥基（3'-羥基、2'-羥基）。已有研究表明，此類化合物的不同羥基位點的酯類衍生物具有不同的藥理活性。處于此類合成目的的需要，常將其中某一羥基保護起來，執行其他羥基的相關反應。酯化法是保護羥基常用方法之一，然而胞苷類化合物的化學位置及特性及其相近，利用傳統的化學方法通常難以一步法完成對特定的羥基的保護，且常采用堿類及重金屬類化學催化劑，污染高，環境不友好。在資源、能源持續消耗，環境壓力極為緊迫的今天，探討采用更為綠色的基團保護反應方法，?如生物催化法，是有機合成領域發展的新方向之一，具有較高的社會和實踐意義。微生物細胞催化是生物催化技術之一，其代替常規化學催化劑及酶催化劑用于胞苷類化合物的基團保護反應迄今尚未見文獻報道。

發明內容

本發明針對目前胞苷類化合物的基團保護反應中使用有毒化學催化劑或綠色但成本較高的酶催化劑在工業化應用中的不足，目的在于提供一種熒光假單胞菌細胞催化胞苷類化合物羥基保護反應的方法。該方法原材料價廉易購買，利用熒光假單胞菌細胞上的鏈接酶進行催化反應，不需要酶的分離純化，反應對胞苷類化合物仲羥基的區域選擇性達到80%以上，克服了傳統化學方法的選擇性低導致底物利用率低，產物純度低，易生成副產物等缺點。同為綠色，反應條件溫和的生物催化劑，細胞催化劑較之離體酶催化劑具有穩定性高，價廉、易獲取的優點。

本發明方法簡單易操作，原材料價廉易購買，不涉及酶的分離純化。所制備的細菌細胞催化劑可選擇性催化合成阿糖胞苷的5′-單酯，區域選擇性高于80%，從而克服了傳統化學方法的選擇性低導致底物利用率低，產物純度低，易生成副產物等缺點。同為綠色,?反應條件溫和的生物催化劑，細胞催化劑較之離體酶催化劑具有穩定性高，價廉、易獲取的優點。

本發明目的通過以下技術方案來實現：

熒光假單胞菌催化胞苷類化合物羥基保護反應的方法：將胞苷類化合物與酯化試劑、熒光假單胞菌加入到含有吡啶的有機溶劑中，胞苷類化合物與酯化試劑摩爾比為1:20～1:50，熒光假單胞菌用量為40~80?mg/mL所述有機溶劑，控制反應體系溫度為20~50℃、震蕩速度為50~300?rpm，反應24～72小時后，胞苷類化合物的5′-羥基被酯化。

進一步優化的，所述反應體系的初始含水量為所述有機溶劑體積的1%～5%。

進一步優化的，所述含有吡啶的有機溶劑為四氫呋喃-吡啶、異辛烷-吡啶、石油醚-吡啶、正己烷-吡啶或異丙醚-吡啶;其中吡啶含量為65%~100%（v/v）。

進一步優化的，所述胞苷類化合物為胞苷、阿糖胞苷或脫氧胞苷。

進一步優化的，所述酯化試劑4為乙酸乙烯酯、丙酸乙烯酯或苯甲酸乙烯酯。

所述生物催化劑優選為熒光假單胞菌（Pseudomonas?fluorescens?GIM1.209）為廣東省微生物研究所保藏菌種，公眾可以從用登陸網站、電話訂購等方式從廣東省微生物研究所菌種保藏中心購買到上述菌種。

本發明與現有的技術相比具有如下的優點：

1.利用微生物細胞為生物催化劑，較之化學催化劑反應條件溫和、環境友好，區域選擇性高；利用乙烯酯作為酯化試劑較傳統酯化劑（乙酸乙酯，苯甲酸等）反應活性高。

2.?該方法中較傳統的化學方法而言保護基團方引入便，且過程綠色；較之酶催化劑，省去了酶分離純化的步驟，直接利用微生物細胞催化反應，成本更為低廉。

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具體實施方式???

為更好理解本發明，下面結合實施例對本發明做進一步地詳細說明，但是本發明要求保護的范圍并不局限于實施例表示的范圍。

實施例1