[發明專利]一種轉化茴香腦生成茴香酸的菌株及其篩選方法和應用

無效

• 申請號: 201210315996.6
• 申請日: 2012-08-31
• 公開（公告）號: CN102888355A
• 公開（公告）日: 2013-01-23
• 發明（設計）人: 武波;申佩弘;曾華賀;宋張楊;蔣承建;唐咸來
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12P7/40;C12R1/01
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104
• 代理人: 黃永校

技術領域

本發明涉及微生物應用領域。具體是一種轉化茴香腦生成茴香酸菌株及發酵產回香酸的方法，?

背景技術

茴香腦是茴香油的主要成分，通過深加工可以制取高附加值的茴香醛、茴香酸和茴香醇及其各種衍生物，茴腦等相關化合物廣泛應用于食品、化妝品、香料、醫藥和化工等多種領域。茴香醛和茴香酸廣泛用于合成香精香料、電鍍金屬的光亮劑同時還是合成多種西藥的中間體，具有較高的價值。目前茴香醛和茴香酸的生產主要為化學合成法（主要為氧化法），生產率低，副產物多，不僅浪費資源而且污染環境。生物轉化法作為一種綠色、環境友好型的生產方法，在轉化茴腦合成茴香醛、茴香酸等化合物方面具有良好的發展前景。?

關于茴香腦的代謝，只在近十年才逐漸開展起來的。目前報道能代謝反式茴香腦的微生物菌種有Arthrobacter?TA13、Pseudomonas?putida?JYR-1、黑曲霉ZJ-9和Pseudomonas?BT-13。Shimoni?E等[從土壤中獲得一株能轉化反式茴腦的細菌菌株TA13，經16S?rDNA序列分析，鑒定為節桿菌Arthrobacter?sp.。此外，他們還研究了Arthrobacter?TA13及其誘變菌株代謝反式茴腦的途徑，根據代謝產物推斷了一條茴香腦環氧化后雙鍵斷裂的代謝途徑，誘變菌株能將異丁子香酚轉化生成香草醛和香草酸，以反式茴腦、茴香醇和茴香醛作為碳源可高產茴香酸。Ryu等報道在Pseudomonas?putida?JYR-1代謝茴香腦的轉化液中，檢測到了茴香腦環氧化合物、茴香酸及對羥基苯甲酸。國內陳敏開展了微生物降解茴腦的篩選，獲得一株茴香醛產率較高的菌株，初步鑒定菌株ZJ-9為真菌黑曲霉，經轉化條件的優化，茴香醛的摩爾轉化率達4.54%。粟桂嬌等以廣西盛產的八角茴香油為碳源，開展了生物降解反式茴腦的菌株篩選工作，獲得一株細菌菌株BT-13，經形態學、生理生化實驗和16S?rDNA序列分析，初步鑒定為假單胞菌Pseudomonas?sp.。同時考察了假單胞菌BT-13在有機溶劑-水兩相系統中的轉化，經發酵條件優化，茴香醛的摩爾轉化率可達7.7%，利用固定化細胞技術在兩相系統中轉化，茴香醛的產量有所提高，達12.6%。?

廣西盛產天然植物八角，八角和八角茴香油的產量居全國第一，這為我國以天然茴香腦?生產茴香醛提供了充足的原料保證。本發明以廣西盛產的八角茴香油為原料，進行微生物轉化茴腦生成茴香酸的菌株篩選。?

發明內容

本發明的目的是提供一種轉化茴香腦生成茴香酸的菌株。?

本發明的另一個目的是提供上述菌株的篩選方法。?

本發明還有一個目的是利用該菌株生物轉化茴香腦生產茴香酸的方法，通過對發酵條件的優化提高茴香酸的產量。?

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種轉化茴香腦生成茴香酸的菌株，分類命名為伯克霍爾德氏菌（Burkholderia?sp）WGB31，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO.M?2012060，保藏日期是2012年3月12日。轉化茴香腦生成茴香酸的菌株（Burkholderia?spWGB31），簡稱為WGB31，下述同。?

一種轉化茴香腦生成茴香酸的菌株是從廣西八角林土壤中篩選得到。?

所述的轉化茴香腦生成茴香酸的菌株（Burkholderia?spWGB31）的篩選方法，包括如下步驟：從八角林土壤中采用不同濃度的茴腦濃度梯度的富集培養基進行富集，再接種到含有5g/L茴腦的篩選培養基上進行平板篩選，轉接到種子培養基中于28℃搖瓶培養12h，再轉接至發酵培養基中搖瓶培養，培養溫度為28℃，培養時間為48h，采用氣相色譜法定量測出茴香酸含量，選出產茴香酸高的菌株。?

所述富集培養基的組分及含量為：葡萄糖20g、蛋白胨10g、K₂HPO₄·3H₂O1g、NaCl?0.5g、MgSO₄·7H₂O?0.5g、FeSO₄0.01g、酵母浸出粉2.5g，蒸餾水定容至1000mL，pH為7.0。?

所述種子培養基的組分及含量為：胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl?10g，蒸餾水定容至1000mL，pH為7.0。?