[發(fā)明專利]天花粉蛋白生物改性工藝無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210315671.8 | 申請日： | 2012-08-31 |
| 公開（公告）號： | CN102792923A | 公開（公告）日： | 2012-11-28 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 徐華民;趙榮華;趙艷琨;徐萌 | 申請（專利權(quán)）人： | 哈爾濱工業(yè)大學(xué) |
| 主分類號： | A01K67/033 | 分類號： | A01K67/033 |
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| 地址： | 150000 黑龍*** | 國省代碼： | 黑龍江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 天花粉 蛋白 生物 改性 工藝 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種天花粉蛋白生物的改性工藝。
背景技術(shù)
天花粉蛋白是一種堿性植物蛋白，為白色或微黃色鱗片狀結(jié)晶，相對分子量24000Da，等電點9.4，為一不含糖和磷酸基團的簡單蛋白質(zhì)，天花粉蛋白水溶性不大，有引濕性，對光、熱不穩(wěn)定，不易被膜蛋白酶酶解，它具有多種生物活性，如引產(chǎn)抗孕、免疫抑制，并能抑制人艾滋病病毒（HIV）的復(fù)制和繁殖，引起藥界重視。
但是由于天花粉蛋白的強抗原性（即異體排斥反應(yīng)），對艾滋病患者的肝臟損傷很大，并引起了患者的高燒、虛弱、炎癥等一系列副作用。因此對天花粉蛋白的改性、修飾、降解的研究引起界內(nèi)的極大關(guān)注。
CN200710173408.9?公開了天花粉蛋白衍生肽及其應(yīng)用，該專利公開了三種天花粉蛋白衍生肽。
CN200410074324.6公開了天花粉蛋白突變體及其編碼基因，天花粉蛋白突變體是天花粉蛋白的自N端的第55位酪氨酸和自N端的第78位天冬氨酸的兩個氨基酸殘基中至少一個突變。
CN01103102.6公開了一種天花粉蛋白突變體及制備方法，產(chǎn)品是從天然天花粉蛋白基因經(jīng)突變改造后，通過合適的表達系統(tǒng)制備得到的。
CN200310112768.X?公開了聚乙二醇化天花粉蛋白藥物及其制備方法。本發(fā)明由聚乙二醇和天花粉蛋白的N端通過胺鍵連接，且一個TCS分子結(jié)合一個聚乙二醇分子所組成。
原則上，上述幾種工藝都可以將天花粉蛋白改性，然而，更有效降低天花粉蛋白毒副作用，擴大天花粉蛋白的用途范圍，將對天花粉的發(fā)展產(chǎn)生積極影響。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種能夠既能降低天花粉毒性又能提高其藥用范圍的天花粉蛋白生物改性工藝。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：1、中藥材栝樓根莖破碎與滅菌；2、谷物麩皮與粉末混合生成天花粉蟲卵；3、天花粉幼蟲培殖；4、天花粉蛆蟲培育；5、天花粉蛆蟲分離、清洗及滅活；6、天花粉蛆蟲干燥；7、天花粉蛆蟲包裝。具體步驟如下：
（1）栝樓根莖破碎后進行滅菌處理，備用；
（2）生成天花粉蟲卵：取1000-2000g谷物麩皮、200-100g栝樓糊狀物、10-100g蛋白胨、10-100g?KH2PO4混合均勻成為天花粉蟲卵培養(yǎng)液，保持溫度25-55℃，時間48-120h，生成蟲卵；
（3）天花粉幼蟲培殖：配制天花粉幼蟲培養(yǎng)液，分裝于20-25個三角瓶中，每瓶分別裝入前面培殖的蟲卵，搖床1-10次/min，培育12-48h，生成含幼蛆培養(yǎng)液；
（4）天花粉蛆蟲培育：配制天花粉蛆蟲培育液，加入含幼蛆培養(yǎng)液進行培育，培育出的天花粉蛆蟲由乳白色變?yōu)槿辄S色，培育過程完成，培育參數(shù)：pH=5.5-8，攪拌速度1-10r/min，溫度25-45℃，通氣量0.5-20L/min，時間72-240h；
（5）天花粉蛆蟲分離、清洗及滅活：將培育液及培育出的天花粉蛆蟲一起放入分離機中蟲液分離，用純凈水漂洗，然后用熱純凈水噴淋天花粉蛆蟲，天花粉蛆蟲被滅活；
（6）天花粉蛆蟲干燥：滅活的天花粉蛆蟲干燥，得到天花粉蛆蟲成品。
本發(fā)明以栝樓為原料，經(jīng)過蛆種繁殖、幼蟲培殖和蛆蟲培養(yǎng)，生成天花粉蛆蟲，天花粉蛆蟲蛋白質(zhì)不僅保留了天花粉蛋白的藥用功效，而且由于相對分子量由24000Da提高到86000Da，因此降低了天花粉蛋白的毒副作用，為天花粉蛋白的應(yīng)用提供了更廣闊的空間。本工藝過程簡單實用，易于控制，節(jié)省能源，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的描述：
實施例1：
（1）1000g新鮮栝樓塊莖用破碎機破碎成小塊，然后用磨漿機磨成糊狀；
（2）將上述栝樓糊狀物與1000-2000g麥麩、10-50g?K2HPO4、10-20g蛋白胨、10-20mL氨水混合并攪拌均勻，保持溫度25-38℃，時間48-240h，繁殖出蟲卵，用孔徑0.1-2mm篩子分篩出蟲卵；
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