[發明專利]一種氟喹諾酮類藥物通用半抗原、人工抗原、廣譜單克隆抗體及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201210315663.3
• 申請日: 2012-08-25
• 公開（公告）號: CN102827076A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 趙國先;王建平;劉彥政;劉靜;張會彩
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: C07D215/56
• 分類號: C07D215/56;C07K14/765;C07K14/77;C07K1/113;C07K16/44;G01N33/577
• 代理公司: 保定市燕趙恒通知識產權代理事務所 13121
• 代理人: 周獻濟

技術領域

本發明涉及食品安全領域，具體涉及一種氟喹諾酮類藥物的通用半抗原、人工抗原和廣譜單克隆抗體及其制備方法與應用。?

背景技術

第三代喹諾酮類藥物是一類人工合成的具有6-氟-7-哌嗪-4-喹諾酮環基本結構的抗菌藥，也稱為氟喹諾酮類藥物。氟喹諾酮類藥物毒性低，半衰期長，抗菌譜廣，抗菌活性強，廣泛用于動物和人類多種感染性疾病的治療。沙拉沙星就是氟喹諾酮類藥物的典型代表。?

隨著氟喹諾酮類藥物在食品動物中的廣泛應用，其在動物源性食品中的殘留問題也引起廣泛的關注。氟喹諾酮類藥物的殘留除了其毒副作用直接危害人體健康外，更為嚴重的是動物源性食品中殘留的藥物容易誘導人類致病菌產生耐藥性，從而不利于該類藥物在人類疾病的治療。因此，必須十分重視此類藥物在動物源性食品中的殘留問題。美國和歐盟都規定了該類藥物的最高殘留限量，中國農業部也頒發了氟喹諾酮類藥物的最高殘留限量，為阻止此類藥物的濫用和殘留起到了巨大的作用。?

目前，對動物源性產品中氟喹諾酮類藥物的殘留檢測主要采用高效液相色譜法、液-質聯用法、氣相色譜法等儀器分析方法。但是儀器分析法受樣品的凈化、濃縮等步驟的影響較大，測定方法復雜，需要專業技術人員，耗費時間長，無法對大批次產品進行檢測，而且成本較高，不適宜進行推廣普及。而免疫分析法，是現在獸藥殘留檢測的重要方法，其方便、快捷，可應用于大批量樣品的篩選，宜于推廣普及。免疫分析法的核心試劑是抗體。現有的文獻報道大多是利用某一種氟喹諾酮類藥物分子中的羧基直接與載體蛋白連接作為免疫原來制備抗體，所得抗體不能識別所有氟喹諾酮類藥物。?

因此，提供一種廣譜適用的氟喹諾酮類藥物免疫分析用抗體就成為該技術領域急需解決的技術難題。?

發明內容

本發明的目的之一是提供一種氟喹諾酮類藥物的通用半抗原。?

本發明的上述發明目的是通過以下技術方案達到的：?

一種氟喹諾酮類藥物的通用半抗原，其分子結構式如式1所示：?

式1。?

本發明的目的之二是上述氟喹諾酮類藥物通用半抗原的制備方法。?

本發明的上述發明目的是通過以下技術方案達到的：?

一種氟喹諾酮類藥物通用半抗原的制備方法，包括如下步驟：?

(a)用沙拉沙星與2-氯乙胺在75～85℃、pH＝7.5～8.5條件下反應；?

(b)反應完全后，在55～65℃、pH＝5.5～6.5條件下析出結晶，得到式1結構的氟喹諾酮類藥物通用半抗原。?

本發明的目的之三是提供一種氟喹諾酮類藥物的通用人工抗原。?

本發明的上述發明目的是通過以下技術方案達到的：?

一種氟喹諾酮類藥物的通用人工抗原，其分子結構式如式2所示：?

式2。?

一種優選技術方案，其特征在于：所述的載體蛋白為卵清蛋白或牛血清白蛋白。?

本發明的目的之四是提供一種氟喹諾酮類藥物通用人工抗原的制備方法。?

本發明的上述發明目的是通過以下技術方案達到的：?

一種氟喹諾酮類藥物通用人工抗原的制備方法，包括如下步驟：?

(a)將式1結構的半抗原溶解于N，N-二甲基甲酰胺中，攪拌溶解得A液，將載體蛋白溶解于磷酸鹽緩沖溶液中，得B液；?

(b)將所述溶液A滴加至所述溶液B中，充分攪拌得到溶液C；?

(c)向溶液C中逐滴加入質量分數為25％的戊二醛水溶液，室溫反應4～5小時后，4000轉/分鐘離心5分鐘；?

(d)將步驟(c)所得液體置于透析袋中，在4～20℃用磷酸鹽緩沖透析3～4天。?

本發明的目的之五是提供一種上述氟喹諾酮類藥物通用人工抗原制備的廣譜單克隆抗體。?

本發明的上述發明目的是通過以下技術方案達到的：?

一種氟喹諾酮類藥物通用人工抗原產生的廣譜單克隆抗體，是能與所述的氟喹諾酮類藥物通用人工抗原發生特異性免疫反應的免疫球蛋白。?

本發明的最后一個目的是提供氟喹諾酮類藥物的廣譜單克隆抗體的應用。所述單克隆抗體用于動物源性食品中氟喹諾酮類藥物的免疫檢測。?