[發明專利]肝臟X受體激動劑的篩選方法

有效

• 申請號: 201210314159.1
• 申請日: 2008-05-30
• 公開（公告）號: CN102872212A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 劉勝勇;溫武哲;郭茂田
• 申請（專利權）人: 國鼎生物科技股份有限公司
• 主分類號: A61K36/71
• 分類號: A61K36/71;C12Q1/02;A61P9/10;A61P25/28;A61P29/00
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司 11021
• 代理人: 張國梁

1.一種升麻萃取物用以制備可活化肝臟X受體alpha(liver?X?receptor?alpha，LXR-α)的藥物的用途，該升麻萃取物分離自升麻(Rhizoma?Cimicifugae)生藥或升麻科學中藥。

2.根據權利要求1所述的用途，其中，所述升麻生藥選自由三葉升麻(Cimicifuga?heracleifolia?Kom.)、興安升麻(Cimicifuga?dahurica(Turcz.)Maxim.)以及升麻(Cimicifuga?foetida?L.)所組成的組中。

3.根據權利要求1所述的用途，其中，所述升麻科學中藥為由升麻(Cimicifuga?foetida?L.)所組成的單方。

4.根據權利要求1或3所述的用途，其中，所述升麻萃取物為醇類萃取物。

5.根據權利要求4所述的用途，其中，所述醇類為乙醇。

6.根據權利要求5所述的用途，其中，所述乙醇濃度為70％。

7.根據權利要求2或3所述的用途，其中，所述升麻萃取物為水萃取物。

8.一種可活化肝臟X受體alpha(liver?X?receptor?alpha，LXR-α)的升麻(Rhizoma?Cimicifugae)萃取物的制備方法，其步驟包含：

(a)取300μg/ml升麻科學中藥水萃取物8ml經Sephadex?LH-20膠體過濾層析以0.5ml/min流速進行，并將濾出物以每管5毫升的體積量分管收集而得到180管分液(fraction)，其中，所述升麻科學中藥為由升麻(Cimicifuga?foetida?L.)所組成的單方；

(b)通過酶標儀(ELISAreader)于254nm吸收光波長下測定這些分液的吸光值，再劃分成14管分液；以及

(c)利用一種肝臟X受體(LXR)激動劑(agonist)的篩選方法檢測該14管分液的報告基因表達量，以獲得可活化肝臟X受體(LXR)的第6管分液，其中所述肝臟X受體(LXR)激動劑(agonist)的篩選方法的步驟包含：

(a)構建一種表達質粒，該表達質粒至少包括肝臟X受體alpha配體結合區域(LXR-αligand?binding?domain)的序列、GAL-4脫氧核糖核酸結合區域(DNAbinding?domain)的序列、可受該GAL-4脫氧核糖核酸結合區域辨識的GAL-4上游啟動序列(GAL-4?upstream?activation?sequence)以及可受該GAL-4上游啟動序列調控的報告基因(reporter?gene)；

(b)將該表達質粒轉染(transfect)至宿主細胞；

(c)在該宿主細胞培養基中加入待測樣品；

(d)檢測培養基中該報告基因的表達量；

(e)對比加入該待測樣品時的該報告基因的表達量與未加入該待測樣品時的該報告基因的表達量；以及

(f)當步驟(e)中該待測樣品的該報告基因的表達量高于未加入該待測樣品的該報告基因的表達量，則表示該待測樣品含有可與肝臟X受體alpha配體結合區域相結合的配體(ligand)，并判定該待測樣品為可活化肝臟X受體alpha的激動劑。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其中，所述報告基因的產物為能被檢測及量化的酶或熒光蛋白。

10.根據權利要求8所述的制備方法，其中，所述報告基因為分泌型堿性磷酸酶(secreted?alkaline?phosphatase，SEAP)。

11.根據權利要求10所述的制備方法，其中，所述報告基因的表達量通過酶標儀(ELISA?reader)分析。

12.根據權利要求8所述的制備方法，其中，所述宿主細胞為哺乳動物細胞。

13.根據權利要求12所述的制備方法，其中，所述哺乳動物細胞為中國倉鼠卵巢細胞(Chinese?hamster?ovary?cell，CHO-k1)。

14.一種用于活化肝臟X受體alpha(liver?X?receptor?alpha，LXR-α)的激動劑(agonist)，其至少包括有效劑量的如權利要求8所述的第6管分液以及醫學上可接受的載體。