[發(fā)明專利]一種蛭弧菌消毒劑及其制備方法和用途

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210313394.7
• 申請(qǐng)日: 2012-08-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102870819A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邵緒霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島叁鼎衛(wèi)生制品有限公司
• 主分類號(hào): A01N63/02
• 分類號(hào): A01N63/02;A01N25/12;A01P1/00
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• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種微生物制劑，尤其還涉及其制備方法和用途，具體的是一種應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)消毒的噬菌蛭弧菌顆粒劑。

背景技術(shù)

噬菌蛭弧菌(Bdellovibrio?bacteriovorus)(以下簡(jiǎn)稱蛭弧菌)是一種專門(mén)以捕食細(xì)菌為生的寄生性細(xì)菌，研究指出，蛭弧菌在凈化養(yǎng)殖水體水質(zhì)、控制或減少水生動(dòng)物疾病的發(fā)生與流行上效果顯著。近年來(lái)，關(guān)于蛭弧菌應(yīng)用在貝類、蝦類、蟹類、魚(yú)類等水產(chǎn)養(yǎng)殖中的研究也越來(lái)越多，這些研究都表明，在養(yǎng)殖過(guò)程中添加了蛭弧菌可以起到疾病防治、提高成活率、增長(zhǎng)體重體長(zhǎng)和凈化養(yǎng)殖生態(tài)環(huán)境的效果。陳麗蕓等研究發(fā)現(xiàn)，添加蛭弧菌后可以使大菱鲆紅嘴病的發(fā)生率由10.17％降到0.93％，說(shuō)明蛭弧菌能有效預(yù)防紅嘴病的發(fā)生，另外，在治療紅嘴病方面，添加蛭弧菌后能100％治愈紅嘴病。

因此，應(yīng)用蛭弧菌防治水產(chǎn)動(dòng)物細(xì)菌性病害和消毒具有良好的發(fā)展前景，然而，目前我國(guó)商品化的蛭弧菌制劑主要是水劑，還有少量的凍干粉劑，蛭弧菌水劑因保存時(shí)間短，質(zhì)量不穩(wěn)定以及運(yùn)輸不便等因素而影響了其使用效果，凍干粉劑也因生產(chǎn)成本高而在很大程度上限制了其應(yīng)用，而微生物固定化法可將游離微生物定位于限定的空間區(qū)域，并保持活性，且能反復(fù)利用，尤其是包埋固定化法，因操作簡(jiǎn)單，在制備過(guò)程中對(duì)微生物活性影響小，制備的顆粒強(qiáng)度較高，更是深受微生態(tài)制劑研發(fā)人員的青睞。

固定化微生物技術(shù)是將特選的微生物固定在選證的載體上，使其高度密集并保持生物活性，在適宜條件下能夠快速、大量增殖的生物技術(shù)。在微生物的固定化方法中，以包埋法最為常用。它的原理是將生物體細(xì)胞截留在水不溶性的凝膠聚合物孔隙的網(wǎng)絡(luò)中，通過(guò)聚合作用或通過(guò)離子網(wǎng)絡(luò)形成，或通過(guò)沉淀作用，或通過(guò)改變?nèi)軇囟取H值使細(xì)胞截留。凝膠聚合物的網(wǎng)絡(luò)可以阻止細(xì)胞的泄露，同時(shí)能讓基質(zhì)滲入和產(chǎn)物擴(kuò)散出來(lái)。

包埋材料可以分為兩大類：

(1)天然高分子多糖類，如海藻酸鹽、瓊脂、明膠等，其中以海藻酸鈉和卡拉膠應(yīng)用最多，它們具有固化方便，對(duì)微生物毒性小及固定化密度高等優(yōu)點(diǎn)，但是它們抗微生物分解性能較差，機(jī)械強(qiáng)度低，但是可使用交聯(lián)劑進(jìn)行穩(wěn)定化處理，但活力和傳質(zhì)性能又會(huì)下降。

(2)合成高分子化合物，如聚丙烯酞胺等。這類交聯(lián)劑的突出優(yōu)點(diǎn)是抗微生物分解性能好，機(jī)械強(qiáng)度高，化學(xué)性能穩(wěn)定。但是聚合物網(wǎng)絡(luò)的形成條件比較劇烈，對(duì)微生物細(xì)胞的損害較大，而且成形的多樣性和可控性不好。張小能等在《噬菌蛭弧菌顆粒劑制備條件的優(yōu)化》中用海藻酸鈉包埋法研究了噬菌蛭弧菌顆粒劑制備條件的優(yōu)化，因?yàn)楹Ｔ逅徕c價(jià)格較高，制得的蛭弧菌顆粒劑成本較高，不適合大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種成本較低，活力和機(jī)械強(qiáng)度等更佳的噬菌蛭弧菌顆粒劑。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種蛭弧菌顆粒劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)蛭弧菌菌液的制備：

將蛭弧菌菌種接種于100mL?1/10NB培養(yǎng)基中，同時(shí)加入100L的，于35℃-37℃溫度下100r/min-800r/min下?lián)u床振蕩培養(yǎng)24h-48h，優(yōu)化的，搖床振蕩為500r/min，使蛭弧菌菌液濃度為1.0×10⁹CFU/mL-1.0×10¹³CFU/mL；

(2)蛭弧菌包埋顆粒的制備：

取質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％-10％濃度的瓊脂膠體溶液和步驟(1)制得蛭弧菌菌液，體積比為20∶100-50∶100，放入攪拌器中，并加入花生油，花生油和瓊脂膠體-蛭弧菌混合液的體積比為1∶100-5∶100；

攪拌器在30℃恒溫?cái)嚢?0min，快速吸入無(wú)菌注射器中，滴入到質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1％-10％的CaCl₂溶液中固化12h-24h，然后收集蛭弧菌固定化顆粒于-20℃-30℃條件下冷凍干燥24h既得蛭弧菌顆粒劑。

大腸桿菌菌懸液的的濃度為1.0×10⁶CFU/mL-1.0×10⁹CFU/mL。

瓊脂膠體溶液也可以用明膠代替。

蛭弧菌包埋顆粒的制備中還加入戊二醛交聯(lián)劑，體積分?jǐn)?shù)為0.1％-1％。

蛭弧菌菌種為市場(chǎng)上銷售的蛭弧菌制劑，經(jīng)增殖、純化，保存?zhèn)溆谩４竽c桿菌菌懸液為常規(guī)微生物實(shí)驗(yàn)制得。

本發(fā)明的有益效果是：采用瓊脂膠體溶液、明膠溶液包埋法和戊二醛交聯(lián)法相結(jié)合的方式，制備一種活力和機(jī)械強(qiáng)度等更佳的噬菌蛭弧菌顆粒劑，經(jīng)濟(jì)安全、保存時(shí)間長(zhǎng)，可以用于水產(chǎn)養(yǎng)殖、畜禽養(yǎng)殖等多個(gè)行業(yè)。