[發明專利]檢測轉人血清白蛋白水稻品系114-7-2的組合物及其試劑盒

有效

• 申請號: 201210313118.0
• 申請日: 2012-08-29
• 公開（公告）號: CN102827936A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 黃新;張麗麗
• 申請（專利權）人: 中國檢驗檢疫科學研究院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種檢測轉hsa基因表達人血清蛋白水稻品系114-7-2的組合物及其試劑盒。

背景技術

水稻是我國乃至全世界最重要的糧食作物之一，是世界上食用人口最多、歷史最悠久的農作物。隨著生物技術的發展，轉基因技術正廣泛地應用于農作物改性，其中2009年我國已批準了轉基因水稻Bt63的安全證書。目前，還有多個轉基因品系已進入環境釋放和生產性試驗階段。

轉人血清白蛋白水稻品系114-7-2是由武漢大學楊代常教授利用水稻胚乳細胞的蛋白體，采用水稻胚乳特異性表達的啟動子和信號肽，介導重組人血清白蛋白進入水稻胚乳細胞的內膜系統，并儲存到水稻胚乳的蛋白體中，從而使重組人血清白蛋白能在水稻種子內大量積累的轉基因水稻品系，所導入外源基因是人血清白蛋白（HSA）。轉人血清白蛋白水稻品系114-7-2作為一個高效蛋白質表達技術平臺，可以用于表達包括醫藥、食品添加劑、美容、營養和工業用等各種用途的蛋白質或多肽，使傳統的蛋白藥物的工業發酵生產方式變為農業生產方式生產，具有極高地推廣價值和應用前景，可以產生巨大的經濟和社會效應。

在轉基因生物安全受到越來越廣泛關注的當今社會，以生物技術為基礎的轉基因檢測方法成了監管轉基因植物及食品的有效手段。實時熒光PCR（Real?time?PCR）就是其中一個最常用最有效的方法。實時熒光PCR是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針，通過對PCR擴增反應中每一個循環產物熒光信號的實時檢測實現對起始模板定量及定性的分析，具有高特異性和高靈敏度的優點。

發明內容

本發明的目的是提供檢測轉人血清白蛋白水稻品系114-7-2的組合物及其試劑盒。在本發明中，所述轉人血清白蛋白水稻品系114-7-2為轉hsa基因表達人血清蛋白水稻品系114-7-2（Large-scale?production?of?functional?human?serum?albumin?from?transgenic?rice?seeds.Proceedings?of?the?National?Academy?of?Sciences?10.1073/pnas.1109736108）。

本發明所提供的用于檢測或輔助檢測待測水稻是否為轉人血清白蛋白水稻品系114-7-2的組合物由一個引物對和一個探針組成；所述引物對由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成；所述探針可為TaqMan熒光探針，其核苷酸序列為序列表中序列3。

其中，序列1由17個核苷酸組成；序列2由20個核苷酸組成；序列3由21個核苷酸組成。

TaqMan熒光探針是一種寡核苷酸探針，報告熒光基團連接在探針的5’末端，淬滅熒光基團連接在探針的3’末端。PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。

所述報告熒光基團可為Fam（FAM）、Hex(HEX)、Tet(TET)、Joe(JOE)、Vic(VIC)、Fite(FITE)、Cy3(CY3)或Cy5(CY5)。所述淬滅熒光基團可為Tamra（TAMRA）、Rox(ROX)、Dabcy(DABCY)、Bhq1(BHQ1)或Bhq2(BHQ2)。在本發明中，所述探針5’端標記的報告熒光基團具體為FAM熒光基團，3’端標記的淬滅熒光基團具體為TAMRA熒光基團。

用于檢測或輔助檢測待測水稻是否為轉人血清白蛋白水稻品系114-7-2的引物對也屬于本發明的保護范圍。

在本發明的一個實施例中，所述引物對具體由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA分子組成。

用于檢測或輔助檢測待測水稻是否為轉人血清白蛋白水稻品系114-7-2的探針同樣也屬于本發明的保護范圍。

在本發明的一個實施例中，所述探針的序列具體為序列表中序列3。

在本發明中，所述探針5’端標記的報告熒光基團具體為FAM熒光基團，3’端標記的淬滅熒光基團具體為TAMRA熒光基團。

所述組合物，或所述引物對，或所述探針在制備用于檢測或輔助檢測待測水稻是否為轉人血清白蛋白水稻品系114-7-2的試劑盒中的應用也屬于本發明的保護范圍。