[發明專利]水果可溶性糖快速測定方法

有效

• 申請號: 201210312226.6
• 申請日: 2012-08-29
• 公開（公告）號: CN102788834A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發明（設計）人: 秦巧平;楊興
• 申請（專利權）人: 浙江農林大學
• 主分類號: G01N27/64
• 分類號: G01N27/64
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 周烽

1.一種水果可溶性糖快速測定方法，其特征是按如下步驟進行：

(1)樣品可溶性糖的提取：用不銹鋼小樣品勺挖取少量待測水果的果肉，放入試管中，每個樣品準確稱取50～150mg，記錄所取樣品名及其重量；用移液槍吸取500～1000μL純水加入到試管中，用試管研磨棒將樣品迅速充分勻漿，然后將裝有勻漿液的試管置于微波爐中，低火加熱10～40s至其沸騰即停止加熱；或用水浴鍋100℃加熱5～10min使糖代謝酶完全失活；試管稍冷卻后渦旋混勻，5000rpm常溫離心3～5min，將上清液即含有可溶性糖的溶液移入新試管中，用移液槍取上清液時盡量避免碰到沉淀物；在離心后的沉淀物中加入500～1000μL純水，渦旋、離心后移取上清液至新試管，如此重復2～3次以充分提取樣品中的糖；合并所有上清液；

(2)樣品提取物預處理：步驟(1)提取的液體中若含有少量固體物質，則先用濾紙過濾，無固體物質就直接用固相萃取柱吸附技術進行去除果實中花青素、葉黃素諸雜質的預處理；

(3)高純度的標準溶液制備：準確稱取單糖、雙糖、三糖標樣各1.00g，用純水定容至50mL，搖勻得20mg/mL的糖標準母液；再用純水將糖標準母液分別稀釋成2.00，4.00，6.00，8.00，10.00mg/mL的系列糖標準溶液，分裝于各試管中；

(4)用電噴霧質譜即ESI-MS進行提取物的純凈度檢測：ESI-MS檢測條件為負極電噴霧狀態，正離子掃描，掃描范圍為100～2000質量/電荷比，進樣流速為20μL/min；若檢測到雜質較多，則需要將樣品用固相萃取柱進行再次或多次過柱去雜；

(5)樣品的基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜即MALDI-TOF?MS檢測：將標準樣品和經過預處理的樣品提取物分別與上樣基質即matrix各1μL等量混合，點樣于靶板即Target?Plate上，室溫下自然結晶后開啟MALDI-TOF?MS進行質譜掃描，掃描范圍為100～2000質量/電荷比，讀取并記錄峰面積；

(6)糖標準曲線制作：根據一系列糖標準樣品的質譜掃描結果以標準工作液的濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標，制作糖標準曲線，用于樣品中糖含量的定量分析；

(7)樣品糖的定性和定量分析：將樣品提取物質譜掃描結果與標準品質譜掃描結果進行比對，確定樣品中的糖成分，實現定性分析；根據標準品測定結果制作的標準曲線和樣品質譜掃描結果對樣品中的糖進行定量分析。