[發(fā)明專利]老鴉瓣無性快繁體系的建立方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210311564.8
• 申請日: 2012-08-28
• 公開（公告）號: CN103621401A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭巧生;徐紅建;馬宏亮;朱再標(biāo);趙桂華;鄒琦;蘇碧茹;鄧慧敏;賴曉明
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州白云山中一藥業(yè)有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州華進聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香;曾旻輝

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于中藥材栽培技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及一種老鴉瓣無性快繁體系的建立方法。

背景技術(shù)

老鴉瓣Tulipa?edulis(Miq.)Baker.為百合科(Liliaceae)郁金香屬(Tulipa?L.)藥用植物，分布于江蘇、安徽、浙江、江西、湖北、湖南、遼寧、山東和陜西等省，朝鮮和日本也有分布。其除去膜質(zhì)皮及絨毛后的干燥鱗莖為中藥材光慈菇。據(jù)本草考證，老鴉瓣歷史上曾長期作為中藥材山慈菇的主要基原植物。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為，光慈菇味甘、辛，性寒，有小毒，清熱解毒，散結(jié)消腫，主治咽喉腫痛、瘰疬結(jié)核，瘀滯疼痛，癰癤腫毒，蛇蟲咬傷。目前也是治療多種腫瘤的常用藥，如咽喉癌、淋巴瘤、乳腺癌等。

野外觀察發(fā)現(xiàn)老鴉瓣生長期短，地上莖葉生長時間100d左右。有性繁殖存在“花而不實”現(xiàn)象，種子自然萌發(fā)率低。無性繁殖通過母鱗莖鱗片上的腋芽、母鱗莖基部芽莖等進行，但母鱗莖存在更替現(xiàn)象，當(dāng)年母鱗莖消失，導(dǎo)致繁殖系數(shù)偏低。目前光慈菇藥材主要來源于野生，已滿足不了市場需求，急需一種快速繁殖老鴉瓣的技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

基于此，本發(fā)明提供了一種老鴉瓣無性快繁體系的建立方法。

一種老鴉瓣無性快繁體系的建立方法，包括以下步驟：

(1)外植體準(zhǔn)備

7月底至8月上旬采集自然休眠的老鴉瓣鱗莖，沖洗，于0～2℃進行濕沙冷藏層積處理，3.5～4.5個月取出作為外植體；

(2)外植體消毒

取外植體，除去絨毛層，飽和洗衣粉溶液清洗后，剖取保留完整基部的芯芽，先用酒精，再用升汞浸泡消毒，無菌水沖洗，吸干表面水分，備用；

(3)初代誘導(dǎo)

將消毒后的外植體接種于初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，1～2個月后形成鱗芽和芽莖；所述初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：含蔗糖30g·L^-1、瓊脂5-7g·L^-1、pH5-6的MS培養(yǎng)基；所述初代誘導(dǎo)的培養(yǎng)條件為：光照1500-3000lx，溫度22±1℃，光照時間8-16h/d，濕度70％～80％；

(4)誘導(dǎo)愈傷組織、生成不定芽

將芽莖切段接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，30～50天得到愈傷組織；將愈傷組織接種于繼代增殖培養(yǎng)基中進行繼代增殖；1～2個月后將增殖后的芽莖愈傷組織切塊接種于不定芽分化培養(yǎng)基中培養(yǎng)2-3個月，完成不定芽、叢生芽分化，生成不定芽和叢生芽；所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：含6-BA?0.5-1.0mg·L^-1、NAA1.0-2.0mg·L^-1、蔗糖30g·L^-1、瓊脂5-7g·L^-1、pH5-6的MS培養(yǎng)基；所述愈傷組織繼代增殖培養(yǎng)基為：含6-BA?0.2-1.0mg·L^-1、NAA?0.5-2.0mg·L^-1、蔗糖30g·L^-1、瓊脂5-7g·L^-1、pH5-7的MS培養(yǎng)基；所述愈傷組織不定芽分化培養(yǎng)基為：含6-BA1.0-2.0mg·L^-1、NAA?0-0.5mg·L^-1、蔗糖30g·L^-1、瓊脂5-7g·L^-1、pH5-6的MS培養(yǎng)基；

或者將鱗芽接入不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，直接誘導(dǎo)生成不定芽；所述不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基為：含6-BA?0.5-2mg·L^-1、NAA?0.01-0.5mg·L^-1、蔗糖30g·L^-1、瓊脂5-7g·L^-1、pH5-6的MS培養(yǎng)基；

(5)增殖和壯苗

將步驟(4)獲得的不定芽中的細(xì)弱不定芽轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中增殖，得到再生不定芽，再轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中壯苗得到生根的基部膨大的試管苗，即為老鴉瓣無性快繁體系；

將步驟(4)獲得的不定芽中的短壯不定芽直接轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中進行壯苗，得到生根的基部膨大的試管苗，即為老鴉瓣無性快繁體系；