[發(fā)明專利]硫酸軟骨素的提取純化方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201210311416.6
• 申請日: 2012-08-29
• 公開（公告）號: CN102838691A
• 公開（公告）日: 2012-12-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 戴珊媛
• 申請（專利權(quán)）人: 寧波綠之健藥業(yè)有限公司
• 主分類號: C08B37/08
• 分類號: C08B37/08;C12S3/02
• 代理公司: 南京眾聯(lián)專利代理有限公司 32206
• 代理人: 張慧清

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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及制藥領(lǐng)域，特別是涉及中藥提取領(lǐng)域，更為具體的說是涉及硫酸軟骨素的提取純化方法。

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背景技術(shù)

硫酸軟骨素?(Chondroitin?sulfate)?大量存在于動物軟骨中，商品是從動物組織中提取制備的酸性粘多糖。硫酸軟骨素是糖胺聚糖的一種，主要含有硫酸軟骨素A、硫酸軟骨素C等黏性多糖成分，是由D-葡糖醛酸和N-乙酰氨基半乳糖以β-1,4-糖苷鍵連接而成的重復(fù)二糖單位組成的多糖，并在N-乙酰氨基半乳糖的C-4位或C-6位羥基上發(fā)生硫酸酯化。

主要分為硫酸軟骨素鈉鹽和硫酸軟骨素鈣鹽等，常與葡萄糖胺配合使用，具有止痛，促進軟骨再生的功效，用于治療神經(jīng)痛，偏頭痛，關(guān)節(jié)痛，心腦血管疾病，同時也可以作為關(guān)節(jié)炎、滴眼液以及高血脂的輔助治療用品。不僅如此，硫酸軟骨素還可以作為食品、保健品的添加劑。在醫(yī)藥、化妝品、食品工業(yè)上具有廣泛的用途，市場前景廣闊。

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發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種硫酸軟骨素的提取純化方法，特別是直接以軟骨為原料，利用科工業(yè)化、規(guī)模化的提取純化方法得到硫酸軟骨素。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明公開了以下技術(shù)方案：

一種硫酸軟骨素的提取純化方法，是以軟骨為提取純化原料，包括以下步驟：

（1）????預(yù)處理步驟：將軟骨與足量水混合，加熱，至70-85℃煮泡2-4小時，瀝去水；

（2）????堿化步驟：向步驟（1）得到的軟骨中加入NaOH水溶液，在35-40℃堿化2-4小時；

（3）????酶解步驟：

（3-1）調(diào)節(jié)堿化后的溶液pH?至8.5-9.0，加入胰酶，酶解6-8小時；

（3-2）酶解完成后，對溶液進行胰酶滅活操作，將酶解液冷卻、離心，得到酶解過濾液；?

（4）????一次膜濃縮步驟：將酶解過濾液用截留分子量為10000-50000的超濾膜濃縮至原體積的1/3；

（5）????析晶步驟：向濃縮液中加入92%~95%的乙醇溶液后，逐步調(diào)節(jié)至65%-75%，靜置、析晶，離心過濾，得固體1；

（6）????純化步驟：將步驟（5）中得到的固體1，按照步驟（5）的過程反復(fù)操作，直到濾液呈無色，固體呈白色狀態(tài)為止，收集固體2，棄去濾液；

（7）????二次膜濃縮步驟：將固體2加水溶解，用截留分子量為10000-50000的超濾膜濃縮至溶液比重達(dá)到1.05-1.15；

（8）????噴霧干燥：將步驟（7）得到的濃縮液滅菌，噴霧干燥，得到硫酸軟骨素。

作為一種優(yōu)選本發(fā)明公開了所述用于調(diào)節(jié)pH的溶液為濃度16-18%鹽酸溶液。

作為一種優(yōu)選的方式，本發(fā)明公開了所述胰酶的滅活方式為：將溶液溫度升高至75-80℃，靜置1-2小時，調(diào)節(jié)pH至4-6。

所述步驟（2）中用于堿化的氫氧化鈉溶液為4%~6%的氫氧化鈉水溶液。

同時，本發(fā)明進一步公開了所述步驟（3-1）中胰酶的添加量為軟骨質(zhì)量的2.0-2.2%。

更進一步地，所述步驟（3-2）中采用蝶式離心機進行離心。

所述步驟（8）中采用陶瓷復(fù)合膜對濃縮液滅菌。

所述步驟（8）中噴霧干燥為：進風(fēng)溫度為190-195℃，出風(fēng)溫度為90-95℃。

所述步驟（2）中氫氧化鈉溶液的加入量為軟骨質(zhì)量的2倍以上，所述步驟（1）中水的加入量至少與軟骨同等質(zhì)量。

所述步驟（4）與（7）中，超濾膜的進出壓力范圍為1.0~1.5Mpa。

本發(fā)明中通過對軟骨進行預(yù)處理、堿化、酶解步驟，使得硫酸軟骨素從軟骨中充分分離出來，并且利用一次膜濃縮、析晶、二次膜濃縮步驟將硫酸軟骨素與酶解液中的其他雜質(zhì)分離，并通過噴霧干燥過程得到硫酸軟骨素成品。

由于硫酸軟骨素是一種多糖，所以采用常規(guī)的傳統(tǒng)層析柱分離手段，不僅分離效果差，而且分離消耗高，本發(fā)明通過前處理及酶解與兩次膜濃縮的配合，步驟簡單、消耗低，成品收率高，適合于工業(yè)化、規(guī)模化生產(chǎn)。

同時，在本發(fā)明中優(yōu)選了通過升溫及調(diào)節(jié)pH的方式對胰酶滅活，從而終止酶解過程。采用這樣的滅活方式，對硫酸軟骨素的影響小，而且對后處理無殘留影響，適合工業(yè)化生產(chǎn)。

不僅如此，本發(fā)明還進一步在考慮后處理及生產(chǎn)成本的基礎(chǔ)上，優(yōu)選了pH調(diào)節(jié)劑鹽酸。