[發明專利]一種乳制品中酵母β-葡聚糖的檢測方法

有效

• 申請號: 201210309893.9
• 申請日: 2012-08-28
• 公開（公告）號: CN102809620A
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發明（設計）人: 陳偉;楊月珍;李志偉;錢文濤;季國志;李洪亮;于景華;高連勝
• 申請（專利權）人: 內蒙古蒙牛乳業（集團）股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所 11105
• 代理人: 劉彬

技術領域

本發明涉及一種檢測方法，特別涉及一種乳制品中酵母β-葡聚糖的檢測方法，屬于化學成分檢測的技術領域。

背景技術

酵母β-葡聚糖是以釀酒酵母為原料，經提取、酸堿處理、噴霧干燥等步驟生產而成的新資源食品，分子量2萬-400萬道爾頓；分子式為(C₆H₁₂O₆)_n，n為125-25000；結構式見圖1。

目前，國內尚未有酵母β-葡聚糖在乳制品中定量檢測方法的國家標準和行業標準。

乳制品中的糖主要為乳糖，結構式見圖2。充分水解產物為葡萄糖和半乳糖。

酵母β-葡聚糖是具有β-1,3及/β-1,6結構的葡萄糖聚合物，充分水解產物為葡萄糖。酵母β-葡聚糖不能與乳制品中膠體形成非常穩固的膠體體系，在離心過程中會沉降下來，而乳制品中乳糖、脂類不會沉降，從而使其與乳制品分離；分離后得到的酵母β-葡聚糖經過酸水解形成葡萄糖溶液；使用HPLC測定其中葡萄糖和半乳糖的含量，進而通過葡萄糖比半乳糖多出的部分計算出酵母β-葡聚糖的含量。

發明內容

本發明的目的是開發一種酵母β-葡聚糖在乳制品中定量檢測的方法，其檢測靈敏度高，檢測準確度高，重復性好。

本發明的技術方案如下：

1.樣品前處理

1.1稱樣

在50mL高速離心管中稱取待測液體樣品25.0000x?N?g，其中固體樣品5.0000x?Ng加超純水至25.0000x?N?g，充分溶解；

其中液體樣品指我公司或市場上的可以流動的乳制品，如：調制乳、酸牛奶、乳飲料等；固體樣品指奶粉、奶酪、冰淇淋等產品。

1.2沉淀

加入5x?N?mL?20%乙酸鋅溶液和5x?N?mL?10%亞鐵氰化鉀溶液，充分振蕩混合后于5500g離心10min，去掉上清液。

1.3水洗

沉淀物加15x?N?mL超純水，玻璃棒攪勻，用10x?Nml超純水沖洗玻璃棒，振蕩混合均勻后，于5500g離心10min，去掉上清液。

1.4醇洗

沉淀物加15x?N?mL?75%乙醇，玻璃棒攪勻，用10x?N?mL?75%乙醇沖洗玻璃棒，震蕩混合均勻后，于5500g離心10min，去掉上清液。

1.5二次水洗

沉淀物再加15x?N?mL超純水，玻璃棒攪勻，用10x?NmL超純水沖洗玻璃棒，震蕩混合均勻后，于5500g離心10min，去掉上清液。

2.標準品前處理

2.1稱樣

在250mL?SCHOTT瓶中稱入0.0105g（稱準至0.0002g）Sigma?G5011標準品。

2.2標準品預溶

加入50mL超純水預溶。

3.葡萄糖標準曲線制備

吸取葡萄糖標液1、3、5mL到10mL容量瓶中，用超純水定容到刻度，得到葡萄糖為20、60、100mg/L的混合標樣。在色譜條件下準確進樣20uL，繪制色譜峰面積和標準物質量濃度之間的標準曲線，得出回歸方程。

4.半乳糖標準曲線制備

吸取半乳糖標液1、3、5mL到10mL容量瓶中，用超純水定容到刻度，得到半乳糖為20、60、100mg/L的混合標樣。在色譜條件下準確進樣20uL，繪制色譜峰面積和標準物質量濃度之間的標準曲線，得出回歸方程。

5.樣品及標準品水解

5.1樣品加酸

將1.5得到的沉淀物轉入250mL?SCHOTT瓶中，加入12x?N?mL鹽酸（37%），加超純水至150mL，振蕩混勻。

5.2標準品加酸

在2.2得到的標準品溶液中，加入12mL鹽酸（37%），加超純水至150mL，振蕩混勻。

5.3水解

將SCHOTT瓶放入高壓滅菌鍋121℃處理60min。水解完成后馬上冷卻。用40%氫氧化鈉，將溶液調pH到6-7，然后定容至250mL。

6.色譜檢測葡萄糖、半乳糖含量

可以采用但不僅限于以下色譜柱及檢測器對葡萄糖、半乳糖含量進行分析。

1）糖柱：

色譜柱：糖柱（Waters?Sugar-pak?Ⅰ6.5?x?300mm）

流速：0.5ml/min

溫度：80℃

流動相：超純水

檢測器：蒸發光散射檢測器或者示差折光檢測器

2）氨基色譜柱：