[發明專利]一種手性分離多種側鏈保護氨基酸的方法

無效

• 申請號: 201210308494.0
• 申請日: 2012-08-28
• 公開（公告）號: CN102824900A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 巢慶;徐紅巖
• 申請（專利權）人: 吉爾生化（上海）有限公司;上海吉爾多肽有限公司;無錫亞肽生物科技有限公司
• 主分類號: B01J20/29
• 分類號: B01J20/29;C07C227/34;C07C229/24;C07C229/22;C07C229/36
• 代理公司: 上海浦東良風專利代理有限責任公司 31113
• 代理人: 張勁風

技術領域

本發明涉及一種利用大環抗生素-替考拉寧鍵合的手性固定相來手性分離側鏈帶保護的氨基酸，利用手性固定相在高效液相色譜系統上手性分離一些側鏈帶保護的氨基酸對映異構體，?DL-天門冬氨酸-4-叔丁基酯，DL-谷氨酸-5-叔丁基酯，O-叔丁基-?DL-絲氨酸，O-叔丁基-?DL-酪氨酸。

背景技術

由于藥物治療多肽副作用低，藥效高，針對性強，不會蓄積于體內而引起中毒的優點，越來越多的多肽藥物應用到了癌癥，肝炎，糖尿病臨床治療中，目前國內的藥物治療多肽發展迅速，目前藥物多肽合成方法中無論是液相合成，固相合成，片段連接都會使用到氨基酸衍生物作為原料，而氨基酸衍生物的光學純度對合成多肽的質量尤為重要，因此需要一種快速，簡單，經濟，應用范圍廣的手性分離方法。

目前報道的氨基酸手性分離的方法集中在非衍生化的天然氨基酸和主鏈N端有Boc,Z,或者Fmoc保護的這些方面，主要是利用冠醚，纖維素，大環抗生素類手性固定相來進行手性分離（高效液相色譜手性冠醚固定相拆分丙氨酸，正纈氨酸和犬尿氨酸對映體?2009；在替考拉寧鍵合的手性固定相上比較N-叔丁氧羰基氨基酸及其未保護氨基酸類似物的對映體選擇性分離1999（omparison?of?enantioselective?separation?of?N-tert-butyloxycarbonyl?amino?acids?and?their?non-blocked?analogues?teicoplanin-based?chiral?stationary?phase?1999）），側鏈的羧基或者羥基帶保護基團而主鏈上未保護的氨基酸手性分離的報道卻很少。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用高效液相色譜法，同時使用鍵合替考拉寧的手性固定相進行多種側鏈保護氨基酸衍生物的手性分離方法，考察流動相中有機相的比例對手性分離的影響，最終確定合適的分離條件。主要解決解決高效液相色譜法手性分離體系中使用的流動相體系比較繁瑣和手性色譜柱不穩定的技術問題。

本發明的技術方案如下：一種手性分離多種側鏈保護氨基酸的方法，采用替考拉寧手性固定相的高效液相色譜方法。包括以下步驟：

1、用色譜級的甲醇和蒸餾水超聲脫氣，作為流動相。

2、甲醇和水作為流動相，以甲醇比水體積比40:60的比例平衡手性色譜柱，平衡30分鐘，待紫外檢測器的基線維持在零點左右時可以準備分析樣品。

手性色譜柱：?ChiroBiotic?T（替考拉寧鍵合填料），?5μm，4.6×250mm(I.D)

流動相????A:水；?B:甲醇

??????????時間（min）???????????A????????????B

??????????0．01????????????????60%??????????40%

???????????50.0????????????????60%??????????40%

流速：0.4ml/min；波長：220nm。

3、將DL-天門冬氨酸-4-叔丁基酯、DL-谷氨酸-5-叔丁基酯、O-叔丁基-?DL-絲氨酸、O-叔丁基-?DL-酪氨酸?等外消旋樣品配制成一定濃度，用甲醇-水混合溶液溶解，過濾作為待進樣品。

?4、將配制好的樣品注射進入高效液相色譜系統，在手性固定相分離后，通過色譜工作站記錄分離色譜圖，并查看相關的分離參數，手性分離度這個關鍵指標要好，一般分離度要大于1.5。

按照本發明，所述的手性分離多種側鏈保護氨基酸的方法，手性色譜柱使用的是以硅膠為基質的，在硅膠基質上化學鍵合大環抗生素-替考拉寧的手性色譜柱（Tei-CSP）。

本發明所用的樣品溶解條件為體積比：甲醇:水=40:60；

本發明所述的樣品在4.6mm內徑的分析柱上的樣品濃度分別為:

DL-谷氨酸-5-叔丁基酯?10mg/ml；O-叔丁基-DL?-絲氨酸??10mg/ml；

DL-天門冬氨酸-4-叔丁基酯?10mg/ml；O-叔丁基-DL-酪氨酸?0.6mg/ml。

本發明的有益效果：