[發(fā)明專(zhuān)利]結(jié)球甘藍(lán)組織培養(yǎng)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210308366.6
• 申請(qǐng)日: 2012-08-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102805035A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-12-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 申志彬;申志恒;王僧虎;石曉云
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 邢臺(tái)市蔬菜種子公司
• 主分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 分類(lèi)號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 石家莊匯科專(zhuān)利商標(biāo)事務(wù)所 13115
• 代理人: 王琪

1.結(jié)球甘藍(lán)組織培養(yǎng)方法，其特征在于，包括如下工藝步驟：

A、無(wú)菌苗的培養(yǎng)：將去雜后選出的優(yōu)質(zhì)結(jié)球甘藍(lán)種子消毒，將消毒后的種子接種于MS培養(yǎng)基中進(jìn)行暗培養(yǎng)后制成無(wú)菌苗，按照48ml-52ml培養(yǎng)基接種8-10顆種子的接種量接種，培養(yǎng)溫度22℃-26℃，培養(yǎng)濕度70%-80%，培養(yǎng)周期9-12天；

B、誘導(dǎo)培養(yǎng)：將暗培養(yǎng)后的無(wú)菌苗子葉切成4mm×4mm的塊，將胚軸切成3.6-4.2?mm，接種在誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，觀察外植體在誘導(dǎo)培養(yǎng)過(guò)程中的變化和不定芽的誘導(dǎo)情況；誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基的組成為：

MS+6-BA?2.0-3.0mg/L，NAA?0.1-0.2mg/L，蔗糖?25-30g/L，瓊脂?6.5-7g/L，pH值=5.8；

誘導(dǎo)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：溫度24℃-26℃，光照強(qiáng)度1000-2000Lx，光照時(shí)間12小時(shí)/天，培養(yǎng)濕度70%-80%，培養(yǎng)周期25-35天；

C、增殖培養(yǎng)：將誘導(dǎo)的不定芽接種按照每瓶接種3-4個(gè)的接種量接種于體積為?48ml-52ml增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)制成不定苗，25天繼代1次，連續(xù)繼代3次；

增殖培養(yǎng)培養(yǎng)基的組成為：

MS+6-BA?1.0-2.0mg/L，NAA?0.1-0.2mg/L，蔗糖?25-30g/L,瓊脂?6.5-7g/L,pH值=5.8；

增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：溫度24℃-26℃，光照強(qiáng)度1000-2000Lx，光照時(shí)間12小時(shí)/天，培養(yǎng)濕度70%-80%；

D、生根培養(yǎng)：將不定苗分切后按照每瓶接種3-4個(gè)的接種量接種于體積為48ml-52ml生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，14天后觀察生根情況；生根培養(yǎng)培養(yǎng)基的組成為：

1/2MS+NAA?0.1-0.2mg/L或1/2MS+IBA?0.2-0.3mg/L?，蔗糖15-20g/L，瓊脂5.5-6g/L，pH值=5.8；

生根培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為：溫度24℃-26℃，光照強(qiáng)度2200-2500Lx，光照時(shí)間10-12小時(shí)/天，培養(yǎng)濕度70%-80%；

E、再生苗的移植：

當(dāng)甘藍(lán)組培苗產(chǎn)生根系并形成完整植株后，置于溫室中煉苗，煉苗條件為：溫度20℃-25℃，3天后將三角瓶或組培瓶的瓶塞打開(kāi)，7天后取出，洗去根部瓊脂，將其栽植于培養(yǎng)介質(zhì)中，濕度為80%-90%，溫度20℃-23℃，14天后定植于土壤進(jìn)行正常管理。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)球甘藍(lán)組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟A中所述的去雜是將甘藍(lán)種子在流水下沖洗，去掉雜質(zhì)及灰塵。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的結(jié)球甘藍(lán)組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟A中所述的選出優(yōu)質(zhì)結(jié)球甘藍(lán)種子的步驟為將去雜后的結(jié)球甘藍(lán)種子浸泡于水中，沉于水底的為優(yōu)質(zhì)結(jié)球甘藍(lán)種子。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的結(jié)球甘藍(lán)組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟A中所述的消毒是將選出的優(yōu)質(zhì)結(jié)球甘藍(lán)種子先用質(zhì)量百分比為70%的酒精浸泡30?秒，再用質(zhì)量百分比為0.1%的氯化汞消毒8分鐘，然后無(wú)菌水沖洗3-4次。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的結(jié)球甘藍(lán)組織培養(yǎng)方法，其特征在于，步驟A-D中所述的暗培養(yǎng)、誘導(dǎo)培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)過(guò)程中培養(yǎng)室每周在外界空氣質(zhì)量良好情況下進(jìn)行3-4小時(shí)短時(shí)通風(fēng)。