[發(fā)明專利]OB基因用作為鵝脂肪性狀遺傳標記的用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210306638.9
• 申請日: 2012-08-27
• 公開（公告）號: CN102911942A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發(fā)明（設計）人: 曲湘勇;蔣雋;何俊;賀長青
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南農(nóng)業(yè)大學;曲湘勇
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12Q1/68;A01K67/027
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及鵝的分子生物學技術(shù)及育種領(lǐng)域，具體是涉及測定與腹脂重和腹脂率等相關(guān)特征的遺傳標記的存在，更具體地說，是涉及測定顯示該些特征的OB基因的差異，再進一步具體地說，是測定OB基因中的多態(tài)性，即與腹脂重和腹脂率相關(guān)的鵝OB(obese)基因的單核苷酸多態(tài)性(Single?nucleotide?polymorphism，縮寫為SNP)的存在。

背景技術(shù)

現(xiàn)代家禽遺傳育種理論和應用的發(fā)展，使肉用家禽特別是肉雞、肉鴨的生長速度和飼料效率大幅度提高，生產(chǎn)效率與工廠化生產(chǎn)逐相適應。但同時也容易帶來胴體腹部脂肪和皮下脂肪的大量沉積，導致飼料能量的浪費和胴體品質(zhì)不佳。

OB(obese)基因編碼一種瘦蛋白質(zhì)(Leptin)的肽類激素，可抑制脂肪蓄積和維持脂肪細胞大小正常。目前有許多關(guān)于人、鼠OB基因以及少量關(guān)于豬OB基因的研究報道，但家禽OB基因的研究報道還鮮見。OB(obese?receptor)基因在Lepein的信號轉(zhuǎn)導起極重要作用，它與機體脂肪沉積有關(guān)，故OB基因可作為脂肪沉積候選基因。雞OB基因的cDNA于1998年Taouis等克隆和測序，編碼長度492bp，編碼163個氨基酸，含18個氨基酸信號肽，成雞Leptin由146氨基酸組成。Ashwell等用Northern檢測發(fā)現(xiàn)，雞的Leptin在脂肪組織和肝臟中都有表達。雞OB的cDNA于2000年Guy?Horev等和Takeshi等被克隆，與其他哺乳動物OB核苷酸序列的同源性平均為60％，Dunn等將雞的OB基因定位于8號染色體上。顧志良等報道了對雞的OB基因的外顯子9的部分序列進行克隆和測序，發(fā)現(xiàn)一個堿基有突變，產(chǎn)生了多態(tài)性，但氨基酸序列沒有改變(沉默突變)。顧志良等進一步用PCR-SSCP方法研究不同品種雞的OB基因表明：北京油雞AA基因型頻率與其它雞種存在差異，高脂系A基因頻率比低脂系高，并推測基因A可能與沉積較多腹脂有關(guān)。李志輝等研究結(jié)果表明，雞OB基因外顯子9的SNPs基因型對肉雞腹脂重和腹脂率有顯著影響，可以用于雞脂肪性狀的標記輔助選擇。

目前，有關(guān)鵝的DNA遺傳標記、遺傳多樣性和相關(guān)功能基因的研究相對雞來說還很少，且沒有關(guān)于鵝OB基因的研究報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種OB基因及其作為鵝脂肪性狀遺傳標記的用途；同時篩選與鵝脂肪沉積相關(guān)的SNP，以期應用于標記輔助選擇或標記輔助滲入，并提供上述遺傳標記在鵝標記輔助選擇中的應用。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種OB基因，是與表示鵝脂肪性狀的腹脂重和腹脂率和相關(guān)的基因。上述OB基因序列的第151bp處有一個A→G的突變，導致多態(tài)性的存在。

克隆OB基因和檢測151A-151G堿基處突變所用引物的序列如下：

正向引物：5′-TGCCAGATCTTCCAGGATGA-3′，

反向引物：5′-GAGATTCTGAGGTCATTGGC-3′。

上述OB基因在鵝遺傳標記輔助選擇中的應用。

一種鑒定鵝脂肪性狀的遺傳標記的方法，該鵝具有與表示鵝脂肪性狀的腹脂重和腹脂率相關(guān)的基因，該方法包括測定從鵝獲得的核酸樣品中OB基因中多態(tài)性的存在，該多態(tài)性是與表示鵝脂肪性狀指標的腹脂重和腹脂率相關(guān)的多態(tài)性，該多態(tài)性在OB基因序列的58bp處有一個T→G的突變。

上述方法包含克隆得到一個如權(quán)利要求1所述OB基因的DNA序列，擴增目的片斷長度226bp，第58堿基處有一個堿基突變T58-G58。

克隆OB基因和檢測T58-G58堿基處突變所用引物的序列為：

正向引物：5′-TGCCAGATCTTCCAGGATGA-3′，

反向引物：5′-GAGATTCTGAGGTCATTGGC-3′。

上述方法在鵝育種中的應用。

現(xiàn)代家禽遺傳育種理論和應用的發(fā)展，使肉用家禽特別是肉雞、肉鴨的生長速度和飼料效率大幅度提高，生產(chǎn)效率與工廠化生產(chǎn)逐相適應。但同時也容易帶來胴體腹部脂肪和皮下脂肪的大量沉積，導致飼料能量的浪費和胴體品質(zhì)的不佳。針對這個問題，本發(fā)明人選擇鵝作為研究對象，采用分子生物學的方法篩選鵝脂肪性狀相關(guān)基因，其步驟如下：