[發(fā)明專利]Celligen310生物反應(yīng)器制備人二倍體細(xì)胞狂犬病疫苗工藝

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210306506.6
• 申請(qǐng)日: 2012-08-27
• 公開（公告）號(hào): CN103083654A
• 公開（公告）日: 2013-05-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉孝民;劉培生
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 萬(wàn)里明
• 主分類號(hào): A61K39/205
• 分類號(hào): A61K39/205;A61K9/19;A61P31/14;C12N7/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種狂犬病毒純化滅活度苗的制備方法，包括如下步驟：采用Celligen310生物反應(yīng)器培養(yǎng)人二倍體WI-38或MRC-5(以下簡(jiǎn)稱人二倍體細(xì)胞)作為為產(chǎn)毒細(xì)胞，以狂犬病毒PM株作為毒種，經(jīng)過接種、培養(yǎng)、收集病毒濾液，再經(jīng)過濃縮純化并加入保護(hù)液制備得到成品疫苗。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其中所述的狂犬病毒PM株為由美國(guó)Wistar研究所提供并許可用于生產(chǎn)的，所述的人二培體細(xì)胞毒種為通過人二倍體細(xì)胞傳代適應(yīng)的狂犬病毒PM株毒種，所述毒種滴度按lgLD₅₀/ml法不低于7.0。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，所述狂犬病毒純化滅活度苗的具體培養(yǎng)方法為：

1)將人二倍體細(xì)胞在Celligen310生物反應(yīng)器上培養(yǎng)，使之成為致密的單層細(xì)胞，然后接種病毒種子，即狂犬病毒PM株；

2)在33～35℃的適宜溫度下培養(yǎng)病毒，到期后，以灌注法多次收獲病毒；

3)收獲的病毒先利用連續(xù)流離心方法去除細(xì)胞雜質(zhì)，再經(jīng)超濾300KD超濾膜濃縮，然后利用蔗糖密度梯度離心純化，最后經(jīng)4FF凝膠柱層析進(jìn)一步純化；

4)純垢的病毒利用β-丙內(nèi)酯72小時(shí)滅活；

5)過濾除菌后即為原液；

6)各項(xiàng)檢定合格后，加入保護(hù)劑，分裝凍干；

7)凍干后制品檢定合格后即為成品疫苗；

其中，將所述疫苗按照2010年《中國(guó)藥典》第三部狂犬病疫苗規(guī)程質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)，得到的疫苗主要技術(shù)指標(biāo)為：病毒滴度7.0lgLD₅₀/mL；疫苗免疫劑量：0.5mL/人；抗生素殘留量：≤50ng/劑；牛血清殘留量：50ng/劑；熱原：≤50EU；疫苗pH：7.6～7.8；熱穩(wěn)定性符合2010年藥典第三部標(biāo)準(zhǔn)，合格；疫苗效力：≥2.5IU/劑；無(wú)菌檢查：符合2010年藥典第三部標(biāo)準(zhǔn)，合格；支原體檢查：符合2010年藥典第三部標(biāo)準(zhǔn)，合格；異活毒性試驗(yàn)：符合2010年藥典第三部標(biāo)準(zhǔn)，合格；鑒別試驗(yàn)：合格。