[發明專利]一種安全快速提取茶樹老葉片基因組DNA的方法

有效

• 申請號: 201210303751.1
• 申請日: 2012-08-24
• 公開（公告）號: CN102796733A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發明（設計）人: 齊桂年;陳盛相;李成磊
• 申請（專利權）人: 四川農業大學;齊桂年
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種安全快速提取茶樹老葉片基因組DNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將茶樹葉片于液氮研磨至粉末狀，再加入800μL預熱DNA提取緩沖液，搖勻后于65℃水浴30min；所述DNA提取緩沖液由1.5％(w/v)SDS(pH?5.5)，100mmol/L?Tris-HCl(pH8.0)，40mmol/L?EDTA(pH8.0)，1mol/L?NaCl，2.5％PVP，10mmol/L?β-巰基乙醇組成；所述茶樹葉片為新鮮的茶樹老葉片；

(2)加入125μL?5mol/LKAC，搖勻后冰浴20min；

(3)待反應充分后，1.2×10⁴r/min離心3min，將上清液加入吸附柱中并裝入收集管，1.2×10⁴r/min離心1min；

(4)將上述收集管中濾液再次加入吸附柱中并裝入收集管，1.2×10⁴r/min離心1min，棄廢液；

(5)向吸附柱加入800μL的70％乙醇，1.2×10⁴r/min離心1min，棄廢液；

(6)再次加入800μL的70％乙醇，1.2×10⁴r/min離心1min，棄廢液；

(7)重新將吸附柱裝入收集管中，1.2×10⁴r/min離心3min，除去剩余乙醇；

(8)取出吸附柱，于50℃放置5min；

(9)將吸附柱放入新離心管中，加入60μL?TE，于40℃放置5min，1.2×10⁴r/min離心3min；離心管中液體為提取的茶樹基因組DNA。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，液氮研磨后迅速加入DNA提取緩沖液。