[發明專利]一種在果蔬農藥殘留快速檢測中排除果蔬本底色干擾的方法及其應用

無效

• 申請號: 201210302966.1
• 申請日: 2012-08-24
• 公開（公告）號: CN102796803A
• 公開（公告）日: 2012-11-28
• 發明（設計）人: 賴智勇
• 申請（專利權）人: 賴智勇
• 主分類號: C12Q1/46
• 分類號: C12Q1/46;C12Q1/44;C12Q1/42;C12Q1/26;C12Q1/48
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 吳寶根

1.一種在果蔬農藥殘留快速檢測中排除果蔬本底色干擾的方法，其特征在于具體包括如下步驟：

（1）、將待測果蔬樣品溶液推入固定化有農藥快速檢測所用酶的反應器內，于該農藥快速檢測所用酶的最適溫度范圍內進行酶抑制反應；

所述的農藥快速檢測所用酶為膽堿酯酶、非膽堿酯酶的B-酯酶、酪氨酸酶、堿性磷酸酶、酸性磷酸酶或乙酰乳酸合酶；

其中所述的膽堿酯酶為乙酰膽堿酯酶或丁酰膽堿酯酶；

所述的固定化有農藥快速檢測所用酶的反應器，該反應器可以實現液體自由進出反應器，而固定化的農藥快速檢測所用酶不能流出反應器；

（2）、將足量的緩沖液持續推入該固定化有農藥快速檢測所用酶的反應器，將步驟（1）進行酶抑制反應后的果蔬樣品溶液持續帶出固定化有農藥快速檢測所用酶的反應器至廢液池，直至待測果蔬樣品溶液顏色全部帶走為止。

2.如權利要求1所述的一種在果蔬農藥殘留快速檢測中排除果蔬本底色干擾的方法，其特征在于所述的固定化有農藥快速檢測所用酶的反應器中的農藥快速檢測所用酶在反應器中的固定化方法如下：

采用離子交換吸附將農藥快速檢測所用酶固定在40-60目的大孔徑弱酸性離子交換樹脂顆粒上，然后裝載于反應器內；

或采用碳二亞胺法將農藥快速檢測所用酶直接固定在活化后的反應器內表面上。

3.如權利要求1所述的一種在果蔬農藥殘留快速檢測中排除果蔬本底色干擾的方法，其特征在于所述的待測果蔬樣品溶液的制備過程如下：

切碎的果蔬按料液質量體積比1：1-1：5加入pH與農藥快速檢測所用酶相適應的磷酸鹽緩沖液混合，在室溫下攪拌，過濾后獲得的濾液即為待測果蔬樣品溶液。

4.如權利要求1、2或3所述的一種在果蔬農藥殘留快速檢測中排除果蔬本底色干擾的方法在果蔬農藥殘留快速檢測中的應用。

5.如權利要求1、2或3所述的一種在果蔬農藥殘留快速檢測中排除果蔬本底色干擾的方法在果蔬農藥殘留快速檢測中的應用，其特征在于具體包括如下步驟：

（1）、將待測果蔬樣品溶液推入固定化有農藥快速檢測所用酶的反應器內，于農藥快速檢測所用酶的最適溫度范圍內進行酶抑制反應；

（2）、將足量的磷酸鹽緩沖液持續推入該固定化有農藥快速檢測所用酶的反應器，并持續將步驟（1）酶抑制反應后的樣品溶液帶出固定化有農藥快速檢測所用酶的反應器至廢液池，直至待測果蔬樣品溶液顏色全部帶走為止；

（3）、步驟（2）待測果蔬樣品溶液顏色全部帶走后將底物推入固定化有農藥快速檢測所用酶的反應器中，于農藥快速檢測所用酶的最適溫度范圍內進行酶催化水解反應；

（4）、步驟（3）酶催化水解反應完成后推入磷酸鹽緩沖液，將固定化有農藥快速檢測所用酶的反應器中酶催化水解反應產生的產物全部帶出至顯色池中，加入顯色劑與其進行顯色反應后，測定吸光度值A3；?

（5）、將等比例的磷酸鹽緩沖液和顯色液推入顯色池混合，作為空白對照，測得吸光度值A1；

（6）、用等量的磷酸鹽緩沖液代替待測果蔬樣品溶液作為對照樣液，重復上述步驟（1）至步驟（4），測定顯色池中的顯色反應后所得的對照樣液的吸光度值A2；

（7）、通過上述的測定結果，計算農藥快速檢測所用酶的抑制率,并根據國標GBT5009.199-2003進行判斷農藥超標或符合標準；

抑制率=[(A2-A1)-(A3-A1)]/(A2-A1)*100%；

其中，A1為空白對照的吸光度值；

A2為對照樣液的吸光度值；

A3為待測果蔬樣品溶液最終經顯色反應后的吸光度值。