[發明專利]兩種擬青霉屬真菌對三七的生物轉化

無效

• 申請號: 201210301911.9
• 申請日: 2012-08-23
• 公開（公告）號: CN103627770A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發明（設計）人: 虞泓;葛鋒;武陽陽;陳自宏;曾文波;楊俊媛
• 申請（專利權）人: 云南云百草實驗室有限公司
• 主分類號: C12P33/20
• 分類號: C12P33/20;C12P19/40;C12R1/79
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技術領域

本發明屬微生物技術領域，涉及兩種擬青霉屬真菌對三七藥材進行生物轉化的方法。

背景技術

三七[Panax?notoginseng?(Burk.)?F.?H.?Chen]為五加科人參屬多年生草本植物，是我國傳統的藥用植物。主要活性成分為三七總皂苷(Panax?notoginseng?saponins,?PNS)。三七總皂苷在耐缺氧、抗衰老、提高機體免疫力等方面的藥理作用顯著，且總皂苷和部分單體皂苷在血液系統、心腦血管系統、神經系統、物質代謝以及抗炎、抗腫瘤等方面均有較好活性。尤其是稀有皂苷在治療心腦血管疾病、抗腫瘤方面表現出較好的藥理活性，如人參皂苷Rd對心腦血管、神經系統、免疫系統等作用獨特，是一種很有前景的候選藥物。研究表明：天然的人參皂苷含量低，且分子結構不是最佳的活性狀態，可通過生物轉化減少人參皂苷結構中的糖基數目，將天然皂苷中含量較高的Rg1、Rb1、R1、Rc等皂苷轉化為含量甚微的稀有皂苷：Rd、Rh1、F1、F2、C-K等，可提高其療效和生理活性。??

蝙蝠蛾擬青霉（Paecilomyces?hepiali?Chen?&?Dai）和蛹草擬青霉（Paecilomyces?militaris?Liang）是兩種重要的藥用蟲草真菌，該真菌發酵產物中含有以蟲草素和蟲草腺苷為主的藥用成分，具有抗腫瘤、抗菌、抗病毒、免疫調節、清除自由基的功效。

本發明以三七藥材為主要培養基成分，采用兩種藥用真菌蝙蝠蛾擬青霉（Paecilomyces?hepiali?Chen?&?Dai）和蛹草擬青霉（Paecilomyces?militaris?Liang）對三七藥材進行生物轉化，同時獲得藥用稀有人參皂苷、蟲草素和蟲草腺苷，培養物兼具三七藥效和真菌藥效，提高了治療和保健功效。

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發明內容

????本發明提供了一種利用藥用真菌發酵三七藥材，同時獲得真菌和三七藥用活性成分的方法。

該方法的操作步驟如下：

（1）菌種制備：將蝙蝠蛾擬青霉（Paecilomyces?hepiali?Chen?&?Dai）和蛹草擬青霉（Paecilomyces?militaris?Liang）分別接種到PPDA斜面培養基，于26℃恒溫培養7天；

（2）三七培養基：精確稱取1?g過60目篩的三七粉于100?mL三角瓶，加入0.2?mL無機鹽：10?%KH₂PO₄和5?%MgSO₄，20?mL水，自然pH，121℃滅菌30?min；

（3）?液體發酵培養：將步驟（1）中制備好的菌種接入步驟（2）三七培養基中，于10-30℃，120?r/min培養4-16?d；

（4）?液體發酵物后處理：將步驟（3）中培養好的液體發酵物抽濾，用10?mL純水清洗濾渣，合并濾液，4000?r/min離心30?min，上清液加入純水定容至30mL為上清處理液。取10?mL上清處理液加入等體積水飽和正丁醇超聲萃取1?h，靜置分層后，收集上層正丁醇相60℃旋蒸至干燥，用5?mL?70%甲醇溶解，采用HPLC法檢測其皂苷含量。取20?mL上清處理液烘干，取0.1?g該烘干樣品加入1?mL?20%甲醇溶解，采用HPLC法檢測其蟲草素和蟲草腺苷含量。

本發明的關鍵點在于：使用藥用蟲草真菌對三七藥材進行生物轉化，一次發酵過程同時獲得真菌藥效成分和三七藥效成分，使培養物兼具三七和藥用真菌的雙重功效。

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具體實施方式

以下實施例用于說明本發明，但不是對本發明的限制。

實施例1：不同培養溫度對發酵產物有效成分種類和含量的影響

（1）菌種制備：將蝙蝠蛾擬青霉（Paecilomyces?hepiali?Chen?&?Dai）和蛹草擬青霉（Paecilomyces?militaris?Liang）分別接種到PPDA斜面培養基，于26℃恒溫培養7天；

（2）三七培養基：精確稱取1?g過60目篩的三七粉于100?mL三角瓶，加入0.2?mL無機鹽：10?%KH₂PO₄和5?%MgSO₄，20?mL水，自然pH，121℃滅菌30?min；