[發明專利]一種應用于檢測線粒體 DNA A1555G、C1494T 突變的混合液及試劑盒和檢測系統

有效

• 申請號: 201210300590.0
• 申請日: 2012-08-22
• 公開（公告）號: CN102787169A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發明（設計）人: 曹力;郭麗敏
• 申請（專利權）人: 郭麗敏
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

1.一種應用于檢測線粒體DNA?A1555G、C1494T突變的混合液，其特征在于所述混合液包括引物F1、R1和四條探針N1、N2、M1、M2的混合液；

第一條引物序列F1是有意義鏈，為上游通用引物，第二條引物序列R1是反義鏈，為下游通用引物；

四條探針分別為以人體線粒體DNA為模板在線粒體DNA?A1555位點設計的野生型探針一條和突變型探針一條，另在線粒體DNA?C1494位點處設計的野生型探針一條和突變型探針一條。

2.如權利要求1所述的一種應用于檢測線粒體DNAA1555G、C1494T突變的混合液，其特征在于所述一對引物是依據已公開的人類線粒體DNA序列設計的；第一條引物序列F1是有意義鏈，為上游通用引物，位于線粒體DNA的核苷酸序列1445-1465bp之間，其序列為序列表中的SEQ?ID?NO:1；第二條引物序列R1是反義鏈，為下游通用引物，位于線粒體DNA的核苷酸序列1589-1608bp之間，其序列為序列表中的SEQ?ID?NO:2，也包括這兩條引物的互補鏈。

3.如權利要求1或2所述的一種應用于檢測線粒體DNAA1555G、C1494T突變的混合液，其特征在于四條探針之間不能存在相互干擾四條探針的四種熒光發光猝滅基團不能相互抑制或抵消，以便發出四種不同波長的熒光信號能區分兩個位點的四種表現。

4.如權利要求1-3任一項所述的一種應用于檢測線粒體DNA?A1555G、C1494T突變的混合液，其特征在于所述四條探針是包括應用TaqMan-LNA、TaqMan-MGB、TaqMan-AllGlo技術標記設計的探針。

5.如權利要求1-4任一項所述的一種應用于檢測線粒體DNA?A1555G、C1494T突變的混合液，其特征在于第一條探針N1的序列，在線粒體DNA?C1494T的突變型位點附近設計，是有意義鏈，也包括其互補鏈，位于線粒體DNA的核苷酸序列1484-1497bp之間，其序列為序列表中的SEQ?ID?NO:3；第二條探針N2的序列，在線粒體DNA?1494的野生型位點附近設計，是有意義鏈，也包括其互補鏈，位于線粒體DNA的核苷酸序列1483-1498bp之間，其序列為序列表中的SEQ?ID?NO:4；第三條探針M1的序列，在線粒體DNAA1555G的突變型位點附近設計，是反義鏈，也包括其互補鏈，位于線粒體DNA的核苷酸序列1548-1563bp之間，其序列為序列表中的SEQ?ID?NO:5；第四條探針M2的序列，在線粒體DNA?1555的野生型位點附近設計，是反義鏈，也包括其互補鏈，位于線粒體DNA的核苷酸序列1548-1562bp之間，其序列為序列表中的SEQ?ID?NO:6。

6.如權利要求1-5任一項所述的一種應用于檢測線粒體DNA?A1555G、C1494T突變的混合液，其特征在于所述四條探針采用TaqMan-LNA技術標記設計的探針,采用TaqMan-LNA技術標記設計的探針分別帶有以下發光猝滅熒光基團及LNA堿基；第一條探針N1為線粒體DNA?C1494T的突變型LNA探針，其5′末端標記的是CY5熒光報告基團，3′末端標記的是BHQ1熒光猝滅基團，加LNA堿基；第二條探針N2為線粒體DNA1494的野生型LNA探針，其5′末端標記的是ROX熒光報告基團，3′末端標記的是BHQ1熒光猝滅基團，加LNA堿基；第三條探針M1為線粒體DNAA1555G的突變型LNA探針，其5′末端標記的是HEX熒光報告基團，3′末端標記的是BHQ1熒光猝滅基團，加LNA堿基；第四條探針M2為線粒體DNA?1555的野生型LNA探針，其5′末端標記的是FAM熒光報告基團，3′末端標記的是BHQ1熒光猝滅基團，加LNA堿基。