[發(fā)明專利]一種人腦膠質(zhì)瘤細胞系及其建立方法和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210299549.6
• 申請日: 2012-08-21
• 公開（公告）號: CN103627673A
• 公開（公告）日: 2014-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 秦宵然;王科;張一心;謝付波;王建紅;聞丹憶;季從飛;趙奇紅
• 申請（專利權(quán)）人: 上海睿智化學(xué)研究有限公司;南通市腫瘤醫(yī)院
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;A01K67/027;C12Q1/02;A61K49/00
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 朱水平;沈利

1.一種人腦膠質(zhì)瘤細胞系，其特征在于，其保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO:C201115。

2.如權(quán)利要求1所述的人腦膠質(zhì)瘤細胞系的子代細胞系。

3.如權(quán)利要求1或2任一項所述的人腦膠質(zhì)瘤細胞系的用途，其特征在于，用于在哺乳動物中產(chǎn)生腦瘤。

4.如權(quán)利要求3所述的人腦膠質(zhì)瘤細胞系的用途，其特征在于，所述的哺乳動物是免疫缺陷小鼠。

5.一種篩選治療腦膠質(zhì)瘤的候選藥物的方法，其特征在于，包括以下步驟：將測試化合物施用于細胞模型中，施用后抑制細胞增殖或?qū)е录毎蛲龅臏y試化合物為治療腦膠質(zhì)瘤的候選化合物，其中所述的細胞模型是權(quán)利要求1~2任一項所述的人腦膠質(zhì)瘤細胞系。

6.一種篩選治療腦膠質(zhì)瘤的候選藥物的方法，其特征在于，包括以下步驟：將測試化合物施用于動物模型，施用后導(dǎo)致腦膠質(zhì)瘤癥狀改善或治愈的測試化合物就是治療人腦膠質(zhì)瘤的候選化合物，其中所述的動物模型具有權(quán)利要求1~2任一項所述的人腦膠質(zhì)瘤細胞系所導(dǎo)致的腦膠質(zhì)瘤。

7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述的動物模型是免疫缺陷小鼠。

8.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，測試化合物的施用方式選自：局部施用于腦膠質(zhì)瘤病灶處、口服給藥和注射給藥中的一種或幾種。

9.一種如權(quán)利要求1或2任一項所述人腦膠質(zhì)瘤細胞系的建立方法，其特征在于，包括以下步驟，

（1）獲得新鮮的臨床人腦膠質(zhì)瘤手術(shù)切除標(biāo)本，剪切成小塊，使用膠原酶消化腫瘤塊；

（2）將步驟（1）所得的分離細胞進行癌細胞的原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。

10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，步驟（2）所述的原代培養(yǎng)方法包括以下步驟：將分散的人腦膠質(zhì)瘤細胞重懸于含有1×B27、20ng/ml人表皮生長因子、20ng/ml人成纖維細胞生長因子、100U/ml青霉素G和100μg/ml硫酸鏈霉素的DMEM/F12培養(yǎng)液中，置入細胞培養(yǎng)瓶中，于37℃溫箱，5%（V/V）CO₂條件下培養(yǎng)3～5天；

步驟（2）所述的傳代培養(yǎng)方法包括以下步驟：收集舊培養(yǎng)基，離心去上清，細胞沉淀后使用Accutase重懸消化，待細胞分散后加入含有500U/ml青霉素G、500μg/ml硫酸鏈霉素和1.25μg/ml兩性霉素的BHBSS培養(yǎng)液中，終止消化；離心收集的細胞重懸于DMEM/F12培養(yǎng)液中，于新的細胞培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)；當(dāng)細胞傳代培養(yǎng)四代后，細胞由懸浮生長轉(zhuǎn)變?yōu)橘N壁生長，吸棄舊培養(yǎng)液，向瓶中加入新鮮的0.05%胰蛋白酶溶液，待細胞脫落后，加入含有10％胎牛血清、100U/ml青霉素G和100μg/ml硫酸鏈霉素的新鮮RPMI?1640培養(yǎng)液，仔細吹打分散細胞使之脫離瓶壁形成細胞懸液；少量在瓶壁上變圓但沒有脫落的細胞，用無菌細胞刮刀輕輕刮擦培養(yǎng)瓶表面，收集全部細胞，離心，取適量細胞懸液接種于新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)。