[發明專利]除蟲菊組織培養方法

有效

• 申請號: 201210298213.8
• 申請日: 2012-08-21
• 公開（公告）號: CN102783418A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發明（設計）人: 劉科新;朱者舍;李仙
• 申請（專利權）人: 云南南寶生物科技有限責任公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于農業生物技術應用領域，涉及除蟲菊組織培養方法。

背景技術

除蟲菊是一種菊科屬植物，其花朵中含有高效的殺蟲活性物質除蟲菊素；近年來隨著世界各國對食品安全的重視度和整治力度的日益提高，除蟲菊的種植加工產業有了迅速發展。種植栽培除蟲菊其繁殖方式有種子繁殖和無性繁殖兩種，種子繁殖不能保持除蟲菊原有的優良性狀，因此，在實際的產業化種植過程中除蟲菊主要采用無性繁殖的方式進行種植栽培，無性繁殖中常用的方法是分株法，其繁殖速度慢、成活率低，不能滿足除蟲菊產業化栽培種植的需要。

發明內容

針對現有技術中，采用分株法無性繁殖進行除蟲菊的產業化栽培種植時，存在繁殖速度慢、成活率低，不能滿足產業化種植需要的的問題，本發明提供一種除蟲菊組織培養方法，其技術方案包括以下步驟：

（a）外植體取材及滅菌：選取除蟲菊優良品種中未開的花蕾作為外植體，所選取的外植體花蕾要求健壯、無病、無蟲害，選取的花蕾要求花苞尚未展開；

將所選取的花蕾放到自來水下流水沖洗5-10分鐘，然后將沖洗好的花蕾放置在質量百分比濃度為15%的次氯酸鈉溶液中浸泡，在浸泡過程中不斷地攪拌和振蕩，浸泡時間為10-20分鐘，浸泡完成以后，將花蕾從次氯酸鈉溶液中取出來，然后用無菌水沖洗花蕾，沖洗次數為3-5遍，沖洗好的花蕾接種備用；

（b）愈傷組織誘導：將沖洗好的花蕾放到超凈工作臺中，用鑷子剝開花蕾的萼片，然后用剪刀剪掉花蕾上的花瓣，露出花蕾的花托，用接種刀切下花托，將切下來的花托接種到裝有愈傷組織誘導培養基的Ⅰ號培養瓶中，然后將接種有花托的Ⅰ號培養瓶擺放到培養室內培養，調節控制培養室的溫光條件為：溫度20±5℃，光照強度1000-1200Lex，光照時間12hr/d，在此條件下培養30-40天，接種到Ⅰ號培養瓶中的花托膨大成為綠色的愈傷組織；

所述愈傷組織誘導培養基配方為：MS+6-BA(0.5-1.0mg/L)+2、4-D（0.5-1.0mg/L）+水解酪蛋白(20mg/L)+蔗糖(30g/L)+瓊脂(3-4g/L)，PH值5.8；

（c）愈傷組織分化：在Ⅱ號培養瓶中裝入愈傷組織分化培養基，將Ⅰ號培養瓶中得到的綠色的愈傷組織分切成為直徑0.5cm的愈傷組織塊，然后將愈傷組織塊轉接到Ⅱ號培養瓶中的愈傷組織分化培養基上，把接種有愈傷組織塊的Ⅱ號培養瓶擺放到培養室內,?調節控制培養室的溫光條件為：溫度20±5℃，光照強度1000-1200Lex，光照時間12hr/d，在此條件下培養20-30天，接種到Ⅱ號培養瓶中的愈傷組織塊分化后獲得除蟲菊從生苗；

所述愈傷組織分化培養基配方為：MS+6-BA(2.0-3.0mg/L)+NAA（0.1-1.0mg/L）+蔗糖(30g/L)+瓊脂(3-4g/L)，PH值5.8；

（d）無菌苗增殖：在Ⅲ號培養瓶中裝入無菌苗增殖培養基，把Ⅱ號培養瓶中分化獲得的除蟲菊從生苗轉接到Ⅲ號培養瓶中的無菌苗增殖培養基上，把接種有除蟲菊從生苗的Ⅲ號培養瓶擺放到培養室中，調節控制培養室的溫光條件為：溫度20±5℃，光照強度1000-1200Lex，光照時間12hr/d，在此條件下培養30天后，接種到Ⅲ號培養瓶中的除蟲菊從生苗分化擴繁得到更多的除蟲菊從生苗，在Ⅲ號培養瓶中除蟲菊從生苗每次分化擴繁的速度為4-5倍；

所述無菌苗增殖培養基的配方為：MS+6-BA(1.0-3.0mg/L)+NAA（0.1-1.0mg/L）+蔗糖(30g/L)+瓊脂(3-4g/L)，PH值5.8；

重復上述無菌苗增殖過程以后，能擴繁得到大批量的除蟲菊從生苗；

（e）生根：在Ⅳ號培養瓶中裝入除蟲菊生根培養基，將Ⅲ號培養瓶中擴繁得到的除蟲菊從生苗用接種刀切成單株苗，然后將切成的單株苗轉接到Ⅳ號培養瓶中的除蟲菊生根培養基上，把接種有除蟲菊單株苗的Ⅳ號培養瓶放置到培養室中，調節控制培養室的溫光條件為：溫度20±5℃，光照強度1000-1200Lex，光照時間12hr/d，在此條件下培養15-20天后，在Ⅳ號培養瓶中得到除蟲菊生根苗，每株苗的生根數量為3-5條，每條根的長度為1.5-2.0cm；

所述除蟲菊生根培養基的配方為：1/2MS+NAA（0.1-0.5mg/L）+PP₃₃₃(0.5-2.0?mg/L)+蔗糖(30g/L)+瓊脂(3-4g/L)，PH值5.8；