[發明專利]一種鑒定水稻低植酸突變體zju-lpa2雜交后代基因型的引物及方法

有效

• 申請號: 201210297521.9
• 申請日: 2012-08-21
• 公開（公告）號: CN102808029A
• 公開（公告）日: 2012-12-05
• 發明（設計）人: 舒慶堯;趙海軍;徐秀紅
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

1.一種引物，其特征在于，為引物ZHJ1、引物ZHJ2或它們的組合；其中，引物ZHJ1的堿基序列為：

正向引物序列：5’-TCCTTTAGTCTAGGACCGTTGG-3’；

反向引物序列：5’-AGCCGCTTCTTGGAGTGAT-3’

和5’-ACCAGGGATGCCGTTGAG-3’；

引物ZHJ2的堿基序列為：

正向引物序列：5’-AGCCGCTTCTTGGAGTGAT-3’

和5’-ACCAGGGATGCCGTTGAG-3’；

反向引物序列：5’-AGCCGCTTCTTGGAGTGAT-3’。

2.一種鑒定水稻低植酸突變體zju-lpa2雜交后代基因型的方法，包括：

(1)提取水稻樣品苗期葉片總DNA；

(2)以所述總DNA為模板，利用權利要求1所述的引物進行PCR擴增，擴增產物經凝膠電泳分離，染色后拍照成像；

(3)根據成像結果，判斷水稻樣品的基因型；

當利用引物ZHJ1進行PCR擴增，如果只出現350bp特征帶，則該水稻樣品為含低植酸基因ZJU-LPA2的純合型材料，如果只出現498bp特征帶，則該水稻樣品為不含低植酸基因ZJU-LPA2的純合型材料，如果同時出現350bp和498bp特征帶，則該水稻樣品為含低植酸基因ZJU-LPA2的雜合型材料；

當利用引物ZHJ2進行PCR擴增，如果只出現754bp特征帶，則該水稻樣品為含低植酸基因ZJU-LPA2的純合型材料，如果只出現498bp特征帶，則該水稻樣品為不含低植酸基因ZJU-LPA2的純合型材料，如果同時出現754bp和498bp特征帶，則該水稻樣品為含低植酸基因ZJU-LPA2的雜合型材料；

當利用引物ZHJ1和引物ZHJ2進行PCR擴增，如果只出現350bp和754bp特征帶，則該水稻樣品為含低植酸基因ZJU-LPA2的純合型材料，如果只出現498bp特征帶，則該水稻樣品為不含低植酸基因ZJU-LPA2的純合型材料，如果同時出現350bp、754bp和498bp特征帶，則該水稻樣品為含低植酸基因ZJU-LPA2的雜合型材料；

所述的低植酸基因ZJU-LPA2的堿基序列如SEQ?ID?NO.1所示。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，采用CTAB法提取總DNA。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增的反應體系為20μL，其中，2×PCR?Master?Mix緩沖液10μL、10μM正反向引物各0.4μL、總DNA1μL、無菌水補足至20μL。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增的反應程序為：94℃預變性4min；94℃變性30s，57℃退火45s，72℃延伸1min，35個循環；最后72℃延伸7min。