[發明專利]一種甘蔗遠緣雜種胚離體培養育苗的方法

有效

• 申請號: 201210296251.X
• 申請日: 2012-08-20
• 公開（公告）號: CN102823493A
• 公開（公告）日: 2012-12-19
• 發明（設計）人: 毛鈞;蔡青;陸鑫;吳轉娣;張敏;劉新龍;蘇火生;馬麗;劉洪博;林秀琴;范源洪
• 申請（專利權）人: 云南云蔗科技開發有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 陳左

技術領域

本發明涉及一種甘蔗遠緣雜種胚離體培養育苗的方法，屬于甘蔗遺傳育種研究領域。

背景技術

遠緣雜交是進行植物遺傳學、育種學和進化研究的重要途徑，現已成為植物育種取得突破性進展的關鍵環節之一。離體培養技術是一項簡單實用的生物技術，要求的器材簡單，在普通的植物組織培養實驗室中就可以進行。這一技術應用于拯救敗育或發育不良的遠緣雜種胚，將雜交種子進行體外培養，從而可以提高種子成苗率，獲得可育的實生苗后代。目前，胚離體培養技術已廣泛應用于水稻、小麥等糧食作物，在甘蔗等經濟作物中的應用前景也非常值得期待。但是，由于影響雜種胚生長的因素十分復雜，而不同物種不同雜交組合雜種胚生長的條件各不相同，致使雜種胚的離體培養拯救難于程序化，必需針對不同的雜種胚進行各種影響因素的優化，建立起適用于不同物種和組合的雜種胚離體培養育苗體系。

發明內容

本發明的目的在于提供一種甘蔗遠緣雜種胚離體培養育苗的方法，是一種能簡便高效地通過甘蔗雜交種子離體培養獲得實生苗后代的有效方法，該方法有利于提高甘蔗雜交種子的萌發率和成苗率。

本發明通過以下技術方案實現：一種甘蔗遠緣雜種胚離體培養育苗的方法，其特征在于以甘蔗雜種胚作為外植體，先接種到改良的KC萌發培養基上進行萌發培養，出苗后轉移到改良的N6生根培養基上誘導生根；

所述的甘蔗雜種胚外植體為人工剝離后的甘蔗雜交花穗種子；

所述改良的KC萌發培養基配方為：KC?+?1?mg/L?IBA?+?30g/L蔗糖?+?4g/L瓊脂，pH5.8；

所述改良的N6生根培養基配方為：?N6（?大量元素，其它成分不變）+?2?mg/L?NAA+30g/L蔗糖?+?4g/L瓊脂?+?0.2g/L活性炭，pH5.8。

本發明以不同組合的甘蔗遠緣雜交花穗種子作為培養材料，試驗了MS、Knudson?C（KC）、N6等多種改良培養基，并對添加不同2.4-D和IBA濃度的培養基進行了比較研究，最終獲得了適合甘蔗遠緣雜種胚離體培養使用的萌發培養基和生根培養基，建立起一套便捷的甘蔗遠緣雜種胚離體培養育苗的方法。

本發明以不同雜交組合的甘蔗雜種胚作為外植體，先接種到改良的KC萌發培養基上進行萌發培養，出苗后轉移到改良的N6生根培養基上誘導生根，注意種子萌發后周圍的稠狀體應切去，在幼苗生根培養中有利于小苗的成活，該方法能使得甘蔗雜種胚萌發率和生根成苗率得到顯著提高。

所述的甘蔗雜種胚外植體為人工剝離后的甘蔗雜交花穗種子，依次經70％酒精消毒60s和1‰升汞溶液消毒6min處理。

所述改良的KC萌發培養基配方為：KC?+?1?mg/L?IBA?+?30g/L蔗糖?+?4g/L瓊脂，pH?5.8；改良的N6生根培養基配方為：?N6（?大量元素，其它成分不變）+?2?mg/L?NAA+30g/L蔗糖?+?4g/L瓊脂?+?0.2g/L活性炭，pH5.8。

本發明提出的甘蔗遠緣雜種胚離體培養育苗方法與常規甘蔗實生苗育苗技術相比具有顯著優點，由于采用了經試驗改良的萌發培養基和生根培養基進行階段性培養，使得甘蔗雜種胚細胞在出苗和生根不同階段的細胞分化得到了充分增殖，僅用了一個10天左右的出苗培養和一個2周的生根培養周期，即可得到生根的幼苗。本發明簡化了育苗程序，縮短了育苗周期，降低了勞動力成本，提高了甘蔗遠緣雜種胚的萌發率和生根成苗率，可為相關甘蔗科研單位和育種機構在進行實生苗育苗時提供參考借鑒。

具體實施方式：

甘蔗遠緣雜種胚離體培養育苗方法，具體實施中用到的儀器設備有：超凈工作臺、滅菌鍋、低溫冰箱和光照培養箱等，其詳細實施步驟如下：

1．雜交花穗種子剝離

采集甘蔗雜交花穗，人工剝離留取雜交種子，保存至-20℃低溫冰箱備用。

2．培養基配制

按照下列培養基配方，依次配制KC/N6培養基母液于﹣4℃冰箱保存備用。

誘導種子萌發KC改良培養基：KC?+?1?mg/L?IBA?+?30g/L蔗糖?+?4g/L瓊脂；

誘導幼苗生根N6改良培養基：?N6（?大量元素，其它成分不變）+?2?mg/L?NAA+30g/L蔗糖+4g/L瓊脂?+?0.2g/L活性炭；?

以上培養基均為固體培養基，pH5.8。

3．種子消毒接種及離體培養

剝取的甘蔗種子用滅菌紗布包好放在無菌水中泡洗3次，70％含水量的酒精消毒60s，1‰升汞溶液消毒6min，無菌水泡洗5次；接種時用滅過菌的勺把種子取到濾紙上吸去表面水分，在酒精燈旁干燥后用鑷子將種子接種到KC萌發培養基上，封口置于光照培養箱中培養觀察；待種子出苗長到4-5cm時(10天左右)，切去幼苗根部稠狀體，轉接到N6生根培養基上光照培養箱繼續培養，1周后幼苗開始生根，2周后可獲得根系生長情況良好的組培實生苗。