[發明專利]一種粘紅酵母及其在不對稱催化制備（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯中的應用

有效

• 申請號: 201210295765.3
• 申請日: 2012-08-20
• 公開（公告）號: CN102994403A
• 公開（公告）日: 2013-03-27
• 發明（設計）人: 王利群;汪云;汪慶;何玉財;卿青;朱劼;王明慧
• 申請（專利權）人: 常州大學
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12P7/62;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種粘紅酵母CCZU-G5，保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏日期2012年7月12日，保藏編號CGMCC?No.6328。

2.一種如權利要求1所述的粘紅酵母CCZU-G5在不對稱催化制備（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯中的應用，其特征在于所述應用是以2-氧代-4-苯基丁酸乙酯為底物，以粘紅酵母CCZU-G5全細胞為生物催化劑，在水/有機溶劑兩相體系中進行微生物不對稱催化還原反應，反應結束后轉化液經過分離純化得到（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯。

3.如權利要求2所述的粘紅酵母CCZU-G5在不對稱催化制備（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯中的應用，其特征在于所述的生物催化劑粘紅酵母CCZU-G5全細胞來自：粘紅酵母CCZU-G5經發酵培養獲得的發酵液離心得到的濕菌體。

4.如權利要求2所述的粘紅酵母CCZU-G5在不對稱催化制備（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯中的應用，其特征在于所述應用具體是按照以下步驟進行的：

（1）粘紅酵母濕菌體的制備

粘紅酵母CCZU-G5經過活化培養和發酵培養后，將得到的發酵培養液經過離心得到粘紅酵母CCZU-G5濕菌體，作為全細胞生物催化劑；

（2）配制反應體系

在有機溶劑與pH?5～9的磷酸鹽緩沖液配制成反應體系中，加入濃度為20～100g/L的2-氧代-4-苯基丁酸乙酯作為底物，再加入一定量的輔助底物；

（3）生物催化反應

在步驟（2）的反應體系中加入步驟（1）所述濕菌體，在反應溫度為20～50℃，搖床轉速100～250r/min條件下反應1～30h；

（4）轉化液后處理

在步驟（3）的生物催化反應后轉化液經過離心分離菌體，取出上層有機相，下層水相用乙酸乙酯萃取，合并萃取液和有機相，再干燥脫水過夜，將有機相用濾紙過濾，收集有機相，旋轉蒸發回收溶劑，得到無色油狀液體（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯。

5.如權利要求4所述的粘紅酵母CCZU-G5在不對稱催化制備（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯中的應用，其特征在于步驟（1）中活化培養是按以下步驟進行的：將活化培養基的各組分按照以下濃度配制：葡萄糖10～100g/L，蛋白胨10～100g/L，酵母粉10～100g/L，pH自然；115℃滅菌30分鐘，滅菌后冷卻，接入斜面種子，在20～40℃，搖床轉速100～250r/min的條件下培養1～5天，作為活化培養種子液。

6.如權利要求4所述的粘紅酵母CCZU-G5在不對稱催化制備（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯中的應用，其特征在于步驟（1）中發酵培養液是按以下步驟制備的：將發酵培養基的各組分按照濃度濃度配制：葡萄糖10～100g/L，蛋白胨10～100g/L，酵母粉10～100g/L，MgSO₄0.1～1g/L，（NH₄）₂SO₄0.1～1g/L，K₂HPO₄·3H₂O?0.1～1g/L，KH₂PO₄0.1～1g/L，pH?5～9，115℃滅菌30分鐘，滅菌后冷卻，按接種量體積比3～10%接種活化培養種子液，在溫度20～40℃，搖床轉速100～250r/min的條件下培養1～5天后，得發酵培養液。

7.如權利要求4所述的粘紅酵母CCZU-G5在不對稱催化制備（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯中的應用，其特征在于步驟（2）中所述的有機溶劑是乙酸乙酯、乙酸丁酯、苯、甲苯、正己烷、正庚烷、正辛烷、異辛烷、壬烷或癸烷中的一種。

8.如權利要求4所述的粘紅酵母CCZU-G5在不對稱催化制備（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯中的應用，其特征在于步驟（2）中用有機溶劑與pH?5～9的磷酸鹽緩沖液配制成反應體系時，有機溶劑的體積百分比為5～80%。

9.如權利要求4所述的粘紅酵母CCZU-G5在不對稱催化制備（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯中的應用，其特征在于步驟（2）中所述的輔助底物是乙醇、異丙醇、甘油、葡萄糖、蔗糖、乳糖中的一種，其加入量為10～100g/L。

10.如權利要求4所述的粘紅酵母CCZU-G5在不對稱催化制備（R）-2-羥基-4-苯基丁酸乙酯中的應用，其特征在于步驟（3）中所述的濕菌體的加入量為10～100g/L。