[發明專利]一種適合植物組織冰凍切片的包埋劑和冰凍切片的方法

有效

• 申請號: 201210295298.4
• 申請日: 2012-08-20
• 公開（公告）號: CN102816401A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發明（設計）人: 嚴明理;馮濤;向言詞;劉麗莉
• 申請（專利權）人: 湖南科技大學
• 主分類號: C08L29/04
• 分類號: C08L29/04;C08L71/08;C08L1/26;C08L89/00;C08K5/053;C08K5/07;A01N3/00;G01N1/36
• 代理公司: 張家界市慧誠商標專利事務所 43209
• 代理人: 高紅旺

技術領域

本發明涉及能在快速在植物組織中進行組織化學等分析的方法，具體的說，涉及一種用于植物組織冰凍切片方法及包埋劑。?

背景技術

與常規的石蠟切片相比,?冰凍切片具有快速、簡便、易操作等特點,?且有利于進行組織化學、免疫定位和原位雜交等研究。冰凍切片技術在動物和人體的研究中已廣泛應用,?但由于植物細胞結構的特殊性，僅在少數植物組織切片中應用，在植物的研究中難以推廣。如何改進冰凍切片技術和尋找適合的冰凍切片包埋劑是冰凍切片技術在植物細胞學研究應用中所面臨的一個重要問題。目前雖然有冰凍切片組織包埋劑發明的報道（冰凍切片組織支持劑，專利ZL00109471.8；生物組織冰凍切片包埋劑及其配制方法，專利號ZL92102744.3），但這些包埋劑比較適合于動物和人體組織，不適宜用于新鮮的植物組織；也有簡單快速植物組織冰凍切片方法的報道，但這些方法是包埋時選用進口包埋劑OCT(Optimum?cutting?temperature?compound)進行包埋（一種簡單快速植物組織冰凍切片方法.熱帶亞熱帶植物學報,2008,16:386-389；植物冰凍切片技術的改進.南京林業大學學報,2006,30:128-130），進口包埋劑OCT價格貴，不易購買，同時有些植物材料不太適合用OCT包埋。我們在植物組織化學和免疫定位等研究中發現，部分研究的目標化學物質易溶于固定劑，無法先固定再切片；有些目標化學物質溶于醇類物質，無法用乙醇脫水，如在植物細胞中原花色素組織化學染色的顯微觀察時，原花色素易溶于醇類物質，不能用含醇類的固定劑固定和乙醇脫水，以前報道的方法不能完成這些試驗任務，因此尋找一種植物材料非固定的冰凍切片方法及適合于這些植物材料的包埋劑是解決這些試驗難題的關鍵。?

發明內容

本發明的目的在于提供一種價格低廉且適合植物組織冰凍切片的包埋劑和冰凍切片的方法，該方法能解決在植物組織化學、免疫定位和原位雜交等研究的顯微觀察中，目標化學物質易溶于固定劑，無法先固定再切片或目標化學物質溶于醇類物質，無法用乙醇脫水的難題。?

一種適合植物組織冰凍切片的包埋劑，由以下組分的原料配制而成：聚乙烯醇8-10份；聚乙二醇1-2份；羧甲基纖維素納?0.5-1.0份；丙三醇1-2份；甲醛4-7份；膠原蛋白0.5-0.8份；植物凝膠0.3-0.9份；去離子水?90-100份；配置時先將聚乙烯醇加入去離子水中，充分加熱溶解，待溫度降至80-90℃時，依次加入上述的其他原料，水浴加熱溶解后，至室溫備用。?

所述的適合植物冰凍切片包埋劑，由以下組分的原料配制而成：聚乙烯醇9份；聚乙二醇2份；羧甲基纖維素納?1.0份；丙三醇2份；甲醛4份；膠原蛋白0.8份；植物凝膠0.4份；去離子水?100份。?

一種采用權利要求1所述的適合植物組織冰凍切片的包埋劑進行冰凍切片方法，包括冰凍包埋、切片、展片和顯微觀察，其特征在于，在冰凍包埋過程中，把經過組織化學染色處理的目標化學物質直接用包埋劑包裹在樣品臺上進行切片。?

所述目標化學物質為易溶于固定劑、無法先固定再切片的新鮮植物組織。?

所述目標化學物質為易溶于醇類物質、無法用乙醇脫水的新鮮植物組織。?

所述的新鮮植物組織為授粉后25天的芥菜型油菜種子。?

本發明與現有技術相比，找到了一種價格低廉且適合植物組織冰凍切片的包埋劑，制備的切片平整、無皺褶、切片薄、厚度均勻，顯微結果清晰；克服了顯微觀察中目標化學物質易溶于固定劑，無法先固定再切片的難題；克服了目標化學物質溶于醇類物質，無法用乙醇脫水的難題。?

附圖說明

圖1是采用本發明方法的芥菜型油菜種子切片圖。?

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步詳細說明。?

實施例1

（1）包埋劑的制作

包埋劑由下述配比的原料制成:聚乙烯醇9g；聚乙二醇2g；羧甲基纖維素納?1.0g；丙三醇2g；甲醛4g；膠原蛋白0.8g；植物凝膠0.4g；去離子水?100g；配置時先將聚乙烯醇加入去離子水中，充分加熱溶解，待溫度降至80℃時，依次加入上述的其他原料，水浴加熱溶解后降至室溫備用。

（2）冰凍包埋和切片?