[發(fā)明專利]一種調(diào)控?zé)嵝菘说鞍?0表達(dá)、數(shù)量及活性的方法及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210293661.9
• 申請(qǐng)日: 2012-08-17
• 公開（公告）號(hào): CN102816792A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 華子春;莊紅芹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85;A61K45/00;A61K45/06;A61K48/00;A61K38/19;A61P35/00
• 代理公司: 南京知識(shí)律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 胡錫瑜

一、技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種調(diào)控?zé)嵝菘说鞍?0表達(dá)、數(shù)量及活性的方法及其應(yīng)用。

二、背景技術(shù)：

中國(guó)衛(wèi)生部的統(tǒng)計(jì)資料表明：目前中國(guó)每年新生腫瘤患者總數(shù)約212.7萬(wàn)人左右，其中，每年有106萬(wàn)左右的惡性腫瘤新生患者；同時(shí)，全國(guó)約有268.5萬(wàn)左右的腫瘤現(xiàn)有患者，其中惡性腫瘤現(xiàn)有患者148.5萬(wàn)左右。以肺癌的發(fā)病率和死亡率為例，美國(guó)每年約有16萬(wàn)人死于肺癌，其中75%的患者為非小細(xì)胞肺癌（NSCLC）。我國(guó)主要城市中，肺癌的發(fā)病率已占據(jù)各種惡性腫瘤發(fā)病率首位。我國(guó)每年有近80萬(wàn)人死于肺癌，其中非小細(xì)胞肺癌患者約占80-85%（McCracken?M等，2007，CACancer?J?Clin57:190-205）。由于肺癌的發(fā)展進(jìn)程快，早期不易發(fā)現(xiàn)，晚期易轉(zhuǎn)移，因此其死亡率很高。現(xiàn)有的治療方法（如放療、化療等）副作用大、存在藥物抵抗性，治療效果有限，因此，尋求新的治療靶點(diǎn)和新的治療方法顯得十分必要。

細(xì)胞凋亡是目前臨床上最常用的腫瘤治療原理，無(wú)論是化療或者放療都是通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抗腫瘤作用，但是腫瘤細(xì)胞常常會(huì)產(chǎn)生對(duì)細(xì)胞凋亡的抵抗，從而極大地影響細(xì)胞凋亡治療腫瘤的效果。例如，腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體（TRAIL）是腫瘤壞死因子（TNF）超家族成員中繼TNF，F(xiàn)as-L之后發(fā)現(xiàn)的第3個(gè)凋亡分子。TRAIL具有選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞的作用，能誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞及轉(zhuǎn)化細(xì)胞發(fā)生凋亡，但對(duì)正常組織及細(xì)胞無(wú)凋亡誘導(dǎo)作用，并且TRAIL在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過(guò)程中，具有較TNF、Fas-L所引起的炎癥反應(yīng)明顯較少的優(yōu)勢(shì)，因此TRAIL已成為新一代的抗腫瘤藥物的熱點(diǎn)分子（Walczak?H等，1999，Nat?Med5:157-163），目前TRAIL已作為抗腫瘤藥物在美國(guó)正在II期臨床試驗(yàn)、在中國(guó)已經(jīng)完成III期臨床試驗(yàn)，主要用于治療難治性腫瘤如肺癌等，顯示出較好的治療效果。然而，試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)仍有不少病人包括肺癌患者出現(xiàn)對(duì)TRAIL的藥物抵抗，大大降低了TRAIL的治療效果，限制了TRAIL的治療人群，因此，如何克服TRAIL等細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑治療中的藥物耐受成為迫切需要解決的一個(gè)問(wèn)題。

熱休克蛋白HSP，除了作為分子伴侶幫助蛋白正確折疊等基本作用外，還以直接或間接的方式參與了細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)，其作用靶點(diǎn)涉及不同凋亡信號(hào)通路的各主要激酶或關(guān)鍵性調(diào)控蛋白（Jaattela?M，1999，Exp?Cell?Res248:30-43），從而可能會(huì)是引起TRAIL藥物耐受的原因之一。已有研究報(bào)道，利用HSP90特異性的抑制劑在體外抑制前列腺癌腫瘤細(xì)胞內(nèi)HSP90逆轉(zhuǎn)了前列腺癌細(xì)胞對(duì)TRAIL的抵抗性（Ma?Y等，2006，Mol?Cancer?Ther5:170-178）。該研究提示：HSP90可能是逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞對(duì)TRAIL抵抗性的一個(gè)調(diào)控靶點(diǎn)。目前針對(duì)HSP90作為治療靶點(diǎn)的藥物geldanamycin和17-AAG已經(jīng)進(jìn)入臨床研究，然而，雖然geldanamycin和17-AAG有良好的抗腫瘤活性，但仍具有局限性，主要表現(xiàn)在穩(wěn)定性及溶解度有限，分子量大，能夠被細(xì)胞色素P450所代謝，生物利用率低，且geldanamycin具有嚴(yán)重的肝臟毒性，這些都使其臨床應(yīng)用受到了限制。由于HSP家族成員包括HSP110、HSP90、HSP70，中等分子量HSP和小分子量HSP五大家族，因此，其它熱休克蛋白，例如HSP27、HSP70，能夠作為腫瘤治療靶點(diǎn)和腫瘤治療策略和方法嗎？

三、發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是針對(duì)TRAIL等細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑治療過(guò)程中存在的藥物抵抗難題，探索一種增加腫瘤細(xì)胞對(duì)TRAIL的敏感性的新方法，開發(fā)一種新的、有效的肺癌治療策略。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種增加腫瘤組織或細(xì)胞對(duì)細(xì)胞凋亡敏感性的方法，其特征是通過(guò)抑制腫瘤組織或細(xì)胞內(nèi)熱休克蛋白HSP70的表達(dá)來(lái)增加腫瘤組織或細(xì)胞對(duì)細(xì)胞凋亡的敏感性。

進(jìn)一步地，本發(fā)明提供了一種調(diào)控腫瘤組織或細(xì)胞內(nèi)熱休克蛋白HSP70數(shù)量及活性的方法，其特征是通過(guò)常規(guī)的影響細(xì)胞內(nèi)熱休克蛋白HSP70數(shù)量及活性的方法或手段達(dá)到通過(guò)抑制腫瘤組織或細(xì)胞內(nèi)熱休克蛋白HSP70的數(shù)量及活性來(lái)增加腫瘤組織或細(xì)胞對(duì)細(xì)胞凋亡的敏感性的目的。例如，通過(guò)篩選HSP70轉(zhuǎn)錄的抑制劑抑制HSP70mRNA的轉(zhuǎn)錄，或者利用RNA干擾技術(shù)或者反義RNA技術(shù)降低HSP70mRNA的數(shù)量、或者利用HSP70蛋白質(zhì)合成的抑制劑或者通過(guò)加速HSP70蛋白質(zhì)的降解而減少HSP70蛋白質(zhì)的數(shù)量、或者利用HSP70的抑制劑抑制HSP70的功能及活性。