[發明專利]人體內含有外源重組DNA來源的轉錄本、DNA片段、或其翻譯產物，及其檢測方法和應用

有效

• 申請號: 201210293467.0
• 申請日: 2012-08-16
• 公開（公告）號: CN103589740A
• 公開（公告）日: 2014-02-19
• 發明（設計）人: 李伯良;胡光晶;陳佳;趙曉楠;許佳佳;郭冬青;楊新穎;熊纓;李琴;宋保亮;魯明;胡西旵
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海生命科學研究院
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N15/54;C12N9/86;C12N9/10;C12Q1/68;C12Q1/48;C12Q1/34;C12M1/34
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 趙向輝;祝蓮君

技術領域

本發明屬于分子生物學、分子遺傳學和細胞生物學領域，具體地，本發明涉及人體內含有外源重組DNA來源的轉錄本、DNA片段、或其翻譯產物，及其檢測方法和應用。?

背景技術

重組DNA技術自上世紀七十年代創立以來發展非常快速，不僅產生了分子生物學這一新生學科，也拓展了各類生命學科及其相關學科的前沿基礎研究，并且建立了動物、植物、微生物等的細胞、組織、器官、個體等轉基因系統。這些研究成果的成功運用獲得各種大量的轉基因產物，特別是建立了在臨床醫學中對與疾病治療和應用相關的基因工程與基因治療等體系。這些發展既具有商業性、經濟性等方面巨大的建設與價值，也產生理論性、社會性等深遠的影響與意義。?

利用重組DNA技術建立的各種轉基因系統，包括利用重組載體（Vector）或重組質粒（Plasmid）或其它特異重組DNA等，將人工分離或修飾的基因導入到生命體細胞內或進入基因組中，導入基因的表達可以引起宿主生命體性狀的可遺傳的修飾，建立的這一重組DNA技術系統稱之為轉基因系統。?

在轉基因過程中，體外構建重組載體或重組質粒或其它特異重組DNA等必不可少，通常其含有復制起點、啟動子、標記基因、翻譯控制元件、轉錄終止子等各種元件、或其組合元件，使可攜帶經過人工改造的目的基因或DNA片段進入宿主細胞內或進入基因組內。?

隨著重組DNA技術的廣泛應用，除轉基因系統體外構建的重組載體或重組質粒或其它特異重組DNA等外，還包括大量構建的不同容量的重組DNA庫、突變DNA庫及其篩選系統等。這些重組DNA技術的產物也已在自然環境中分布，許多已知的這類基因存在于轉座子、整合子或質粒中，能夠通過接合?(conjunction)或水平基因轉移(horizontal?gene?transfer，HGT)等方式進入到同種甚至不同種的其它細菌等生命體，如在人類的一些病原生物和共生細菌(腸道微生物群)中都有抗性基因轉移的證據等，但是否已進入人體內細胞或基因組、是否進入人體內細胞或基因組表達并引起作用，國際社會在非常密切關注中。?

由于重組DNA技術的迅速發展，人們對包括轉基因系統、DNA庫篩選系統等的安全性越來越重視。就轉基因食品而言，雖然市場上第一個轉基因食品早在上個世紀九十年代初就出現在美國市場，但是目前經美國食品和藥物管理局確定的轉基因食品品種只有幾十種。此外，由于轉基因作物或植物或微生物是人工制造的物種，這些物種對于自然界原來存在的物種而言，是一種外來物種，而且，這些外來物種對環境或生物多樣性造成威脅或危險會持續一段較長的時間，如需10年或更長的時間。?

目前本領域尚不明確重組DNA技術的外源產物是否已進入人或非人哺乳動物的體內細胞或基因組、是否進入體內細胞或基因組表達并引起作用、是否由新生重組啟動子或其它連接的啟動子轉錄表達、人體內外源重組DNA的轉錄本或翻譯產物或DNA片段及其對人體內源基因組DNA或其來源的轉錄本與翻譯產物的影響等，因此迫切需要進行這些方面的研究。?

發明內容

本發明的目的就是提供一種人體內含有外源重組DNA來源的轉錄本、DNA片段、或其翻譯產物及其檢測方法和應用。?

在本發明的第一方面，提供了一種分離的轉錄本，所述轉錄本分離自人或非人哺乳動物，并且所述的轉錄本是：?

(a)：來自于外源重組DNA的轉錄本與人或非人哺乳動物基因組的轉錄本的剪接轉錄本；或?

(b)：來自于外源重組DNA的未剪接的轉錄本。?

在另一優選例中，所述的轉錄本是氨芐青霉素抗性基因或其片段與酰基輔酶A:膽固醇酰基轉移酶1(ACAT1)基因或其片段組成的剪接轉錄本；優選地，所述的剪接轉錄本具有如SEQ?ID?NO.:1所示的多核苷酸。?

在另一優選例中，所述的轉錄本是來自于外源重組DNA的未剪接的氨芐青霉素抗性基因或其DNA片段的轉錄本；優選地，所述的轉錄本具有如SEQ?ID?NO.:2所示的多核苷酸。?

在本發明的第二方面，提供了一種分離的DNA片段，所述的DNA片段分離自人或非人哺乳動物，并且所述的DNA片段來自于外源重組DNA，并重組于人或非人哺乳動物基因組中。?

在另一優選例中，所述的DNA片段編碼權利要求1所述的來自于外源重組DNA的未剪接的轉錄本。?

在本發明的第三方面，提供了一種分離的翻譯產物，所述的翻譯產物是由第一方面所述轉錄本所翻譯的。?